CAPSULEKLEURING: GRONDGEDACHTE EN TECHNIEKEN - BIOLOGIE - 2026

De kleuringscapsule is een differentiële kleurtechniek die de eigenschap heeft van een stresspolysaccharidestructuur rond bepaalde bacteriën en gisten die capsule worden genoemd. Het wordt gebruikt in klinische laboratoria om bepaalde pathologieën te helpen diagnosticeren die worden veroorzaakt door ingekapselde micro-organismen.

Het wordt ook gebruikt in onderwijslaboratoria voor het demonstreren van deze morfologische structuur aan studenten van carrières in de gezondheidswetenschappen, zoals onder andere geneeskunde, bioanalyse, verpleegkunde of cytotechnologie.

Klebsiella pneumoniae-uitstrijkje gekleurd met capsulevlek. Oost-Indische inktmethode met safranine. Bron: А.А.В

Er zijn verschillende eenvoudige technieken om de aanwezigheid van de capsule aan te tonen in de micro-organismen die het bezitten, deze zijn: de negatieve vlek, de Anthony-vlek en een variant die de vorige twee combineert.

Negatieve kleuring wordt voornamelijk gebruikt in CSF-monsters wanneer de aanwezigheid van de gist Cryptococcus neoformans wordt vermoed. Deze gist is een veel voorkomende oorzaak van meningitis.

Deze techniek maakt gebruik van nigrosine of Oost-Indische inkt en is gebaseerd op het creëren van een contrast tussen de achtergrond van het preparaat en de ondoordringbare capsule van het micro-organisme. De achtergrond wordt donker en de capsule is kleurloos. Op deze manier wordt deze structuur onthuld.

Met betrekking tot de Anthony-techniek kan worden gezegd dat deze meestal wordt gebruikt in onderwijslaboratoria om de polysaccharidestructuur in bacteriën zoals Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae en Neisseria meningitidis aan te tonen.

Het gebruik van deze techniek voor diagnostische doeleinden is zeer zeldzaam, aangezien er andere routinetests zijn die de identificatie van deze micro-organismen mogelijk maken.

Basis

De capsule is een sterke structuur van polysaccharide-aard. Dit beschermt de micro-organismen tegen fagocytose en is daarom een ​​moeilijk doordringbare structuur.

Daarom zijn capsulevlekken gebaseerd op contrast. De kleurstoffen kleuren de bodem van het preparaat terwijl de capsule kleurloos blijft.

Daarom is met deze technieken de capsule gemakkelijk herkenbaar. Als het micro-organisme geen capsule heeft, is het niet te onderscheiden met dit type kleuring, omdat alles in dezelfde kleur wordt gekleurd.

Alle technieken die worden gebruikt om de capsule te kleuren, hebben dezelfde grondgedachte, ondanks het gebruik van verschillende kleurstoffen en procedures.

Technieken par

-Anthony vlek

Anthony's vlek gebruikt kristalviolet als vlek. Dit zal het bacteriële lichaam en de achtergrond paars kleuren.

Aan de andere kant wordt 20% kopersulfaat gebruikt. Dit dient als wasoplossing, dat wil zeggen, het verwijdert het overtollige violette kristal uit het preparaat, waardoor de capsules helder worden maar zonder dat het bacteriële lichaam of de achtergrond kleur verliest.

materialen

- Iriserende melk.

- Schuif.

- 1% violet kristal.

- 20% kopersulfaat.

- Optische microscoop.

- Onderdompelingsolie.

Werkwijze

Deze techniek bestaat uit:

1. Kweek het micro-organisme 36 uur in iriserende melk.
2. Plaats een druppel van de cultuur aan het einde van een glaasje en plaats ernaast een druppel violet glas, meng en verspreid met het einde van een ander glaasje.
3. Aan de lucht laten drogen en niet verhitten.
4. Wassen met 20% kopersulfaatoplossing, aan de lucht laten drogen.
5. Observeer onder een microscoop met een immersieobjectief. Zoek naar de uiteinden van de spread.

Het is belangrijk om geen warmte te gebruiken om te fixeren of te drogen, aangezien dit de capsule beschadigt. Ook niet met water wassen.

Interpretatie

Iriserende melk is een uitstekend kweekmedium omdat het de nodige voedingsstoffen levert voor het micro-organisme om een ​​prominente capsule te ontwikkelen.

Aan de andere kant zal de iriserende melk een dikke en compacte bodem vormen die samen met het bacteriële lichaam paars wordt gekleurd, maar de capsule die het micro-organisme omgeeft, blijft kleurloos. Daarom wordt een duidelijke halo waargenomen rond het bacteriële lichaam.

Grafische weergave bij microscopische waarneming van een Klebsiella pneumoniae-uitstrijkje gekleurd met Anthony's vlek. Bron: gemaakt door de auteur MSc. Marielsa Gil.

Voordeel

Het is een eenvoudige techniek om uit te voeren. Vereist geen bevestiging.

Ook moet worden opgemerkt dat andere kweekmedia kunnen worden gebruikt, maar het melkmedium heeft de voorkeur omdat dit het voordeel heeft dat het meer prominente capsules verschaft.

Nadelen

Het is een iets arbeidsintensievere techniek dan negatieve kleuring, en voor de visualisatie ervan moet worden gewacht tot het preparaat volledig is opgedroogd.

-Negatieve kleuring

materialen

- Schuif dia's.

- Kweekmedium met het micro-organisme.

- Chinese inkt of nigrosine.

- Optische microscoop.

- Fysiologische zoutoplossing.

Werkwijze

Plaats een druppel fysiologische zoutoplossing op het dekglaasje en los een klein deel van de microbiële cultuur op. Het is belangrijk dat de bereiding niet te dik is. Plaats vervolgens een druppel Chinese inkt of nigrosine en meng.

Een dekglaasje wordt vervolgens over het preparaat gelegd zonder de vloeistof te laten overlopen. Het wordt onder de microscoop waargenomen door eerst te focussen op een 10X-objectief en vervolgens te verplaatsen naar 40X.

Deze techniek kan ook rechtstreeks op CSF-monsters worden gebruikt. Dat wil zeggen, in plaats van een druppel microbiële cultuur te plaatsen, wordt er een druppel CSF geplaatst.

Voordeel

Het is een eenvoudige methode om uit te voeren en tegelijkertijd niet duur. Het vereist geen fixatie of droging van het preparaat.

Nadelen

Het nadeel is dat het onder een microscoop moet worden geobserveerd voordat het preparaat opdroogt, want als dit gebeurt, zullen de micro-organismen samentrekken, waardoor visualisatie moeilijk wordt.

Aan de andere kant kunnen fout-positieven optreden als de analist onervaren is, aangezien leukocyten vaak worden verward met gisten.

De waarneming van gistcapsules met de Chinese inkt of nigrosine-techniek moet worden beschouwd als een vermoedelijke diagnose van Cryptococcus neoformans totdat deze met de kweek wordt aangetoond.

Dit komt omdat er andere gisten zijn die meningitis kunnen veroorzaken en niet alleen Cryptococcus neoformans, zoals die van het geslacht Candida en Rhodotorula, evenals andere soorten Cryptococcus.

Interpretatie

Als er ingekapselde micro-organismen zijn, wordt een donkere achtergrond waargenomen, met transparante lichamen die in de vloeistof drijven, wat de aanwezigheid van de capsule benadrukt.

Cryptococcus neoformans capsule gekleurd met Chinese inkt. Bron: Photo Credit: Content Provider (s): CDC / Dr. Leanor haley

-Indische inkttechniek

Deze techniek kan ook worden gedaan met nigrosine. Het is een combinatie van de technieken die eerder zijn uitgelegd. Deze techniek maakt gebruik van kristalviolet en Oost-Indische inkt of nigrosine.

Het bacteriële lichaam wordt paars van het kristalviolet omdat het negatief geladen is, terwijl nigrosine de onderkant van het uitstrijkje kleurt. Als de bacterie een capsule heeft, zal deze verschijnen als een transparante halo rond het micro-organisme.

Het kristalviolet kan worden vervangen door een van deze kleuren: safranine, basis fuchsine of methyleenblauw.

materialen

- Violet glas.

- Nigrosine of Oost-Indische inkt.

- Schuif dia's.

- Microscoop.

Werkwijze

- Kweek het micro-organisme in een kweekmedium.

- Plaats een druppel van de cultuur aan het einde van een glaasje en plaats ernaast een druppel kristallen Oost-Indische inkt of nigrosine, meng en verspreid met het uiteinde van een ander glaasje.

- Droog aan de lucht en fixeer niet op warmte.

- Dek af met een violetkristaloplossing gedurende 1 minuut, was met gedestilleerd water maar heel voorzichtig (zachte straal), laat het drogen in de open lucht.

- Observeer onder de microscoop met een immersieobjectief. Zoek naar de uiteinden van de spread.

Interpretatie

Een paars bacterieel lichaam en een donkere achtergrond zullen te zien zijn. De capsule, indien aanwezig, ziet er kleurloos uit rond de bacteriën.

Referenties

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Basistechnieken van de microbiologie. Observatie van bacteriën. Reduca (biologie). Microbiologie-serie. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Basiskleuren in het microbiologisch laboratorium. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Beschikbaar op: medigraphic.com
3. Gil M. Negatieve kleuring: grondgedachte, techniek, voor- en nadelen. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Argentinië. Redactioneel Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Capsule-kleuring: principe, procedure en resultaten. 2019. Gids medische microbiologie. Beschikbaar op: microbeonline.com