PEPTONWATER: GRONDGEDACHTE, BEREIDING EN TOEPASSINGEN - BIOLOGIE - 2025

Het peptonwater is een vloeibaar verrijkingsmedium, niet-selectief, en wordt voornamelijk gebruikt als verdunningsmiddel, voedselmonsters of andere materialen. Dit medium is chemisch gezien heel eenvoudig, het bevat vleespepton, natriumchloride en water.

Het heeft een bepaalde voedingswaarde, waardoor het monster kan worden verrijkt. Als er misbruikte bacteriën zijn, heeft dit medium de kracht om de levensvatbaarheid te herstellen. Het is vooral nuttig bij het herstel van bacteriën die tot de Enterobacteriaceae-familie behoren.

Pepton water in flessen. Bron: MSc. Marielsa gil

In het geval van terugwinning van salmonella's wordt het gebruik van de buffeted pepton water variant aanbevolen; Dit dient als voorverrijkingsmedium voor het monster, in dit geval bevat het andere elementen zoals dinatriumfosfaat en dikaliumfosfaat.

Normaal gesproken wordt peptonwater bereid bij een neutrale pH, maar er zijn andere varianten waarbij de pH 8,5 ± 0,2 (alkalisch) moet zijn, omdat de te isoleren bacterie alkalifiel is, zoals Vibrio cholerae.

Bovendien kan dit medium worden gebruikt als basismedium voor koolhydraatfermentatietesten.

Basis

Peptonen leveren de voedingsstoffen die nodig zijn voor bacteriegroei, met name stikstof en aminozuren met een korte keten, terwijl natriumchloride het osmotische evenwicht in stand houdt.

Bovendien maakt het medium het mogelijk om bacteriële cellen die door industriële processen zijn beschadigd, te dispergeren, homogeniseren en herstellen.

Als verdunningsmiddel is het een ideale oplossing om fysiologische oplossing (SSF) of fosfaatbufferoplossing (PBS) effectief te vervangen.

Bacteriegroei is duidelijk door de troebelheid te observeren.

Voorbereiding

Zelfgemaakte bereiding (niet commercieel)

Weeg 1 g pepton en 8,5 g natriumchloride af, los op in 1 liter gedestilleerd water. De pH moet worden aangepast tot 7,0. Hiervoor kan 1N natriumchloride worden gebruikt.

Voorbereiding met commercieel medium

Weeg 15 g van het gedehydrateerde medium af en los op in een liter gedestilleerd water. Homogeniseer het mengsel. Indien nodig wordt het mengsel 1 minuut gekookt om het geheel te helpen oplossen. Serveer indien nodig in flessen van 100 ml of buisjes van 10 ml. Autoclaaf gedurende 15 minuten op 121 ° C.

Koel en gebruik of bewaar in de koelkast. De uiteindelijke pH van het medium is 7,2 ± 0,2.

De kleur van het gedehydrateerde medium is lichtbeige en het bereide medium is licht amber.

Voorbereiding voor fermentatietests

Aan de vorige bereiding -voor sterilisatie- moet het koolhydraat worden toegevoegd tot een eindconcentratie van 1%, plus de Andrade-indicator (zuurfuchsine) of fenolrood (0,018 g / L). De buizen moeten worden uitgerust met een Durham-bel om gasvorming te observeren.

Andere varianten van peptonwater

Gebufferd of gebufferd peptonwater

Het bevat enzymatisch caseïnehydrolysaat, natriumchloride, diwaterstofkaliumfosfaat en natriumwaterstoffosfaatdodecahydraat. De uiteindelijke pH is 7,0 ± 0,2.

Weeg voor de bereiding 20 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Laat het ongeveer 5 minuten rusten. Verwarm gedurende 1 minuut tot het volledig is opgelost.

Giet indien nodig in geschikte potten. Steriliseer gedurende 15 minuten in de autoclaaf bij 121 ° C.

-Alkalisch peptonwater

Weeg 25 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter water. Ga verder zoals hierboven beschreven. De pH varieert van 8,3 tot 8,7.

Gebruik

Het inoculum wordt gedaan door het monster rechtstreeks te plaatsen.

Het wordt gebruikt om monsters te verdunnen, vooral wanneer wordt vermoed dat er mogelijk beschadigde bacteriën zijn. Gewoonlijk zijn de verdunningen 1:10 en 1: 100.

Incubeer gedurende 24 uur in aerobiose bij 35-37 ° C.

Kruk monsters

Voor ontlastingsmonsters voor salmonella wordt het gebruik van gebufferd of gebufferd water als voorverrijkingsmedium aanbevolen.

Ga hiervoor als volgt te werk:

Als de ontlasting is gevormd, neem dan 1 g monster. Als ze vloeibaar zijn, neem dan 1 ml ontlasting en suspendeer in een buis met 10 ml gebufferd peptonwater. In het geval van rectale wattenstaafjes, loos het materiaal in het wattenstaafje in de buis met gebufferd peptonwater.

Meng en homogeniseer het monster in alle gevallen zeer goed.

Incubeer 18 tot 24 uur bij 37 ° C. Vervolgens subcultuur in een verrijkingsbouillon zoals selenietcystinebouillon of tetrathionaatbouillon bij 37 ° C gedurende 18-24 uur langer. Tenslotte, cultiveer in selectieve media voor Salmonella, zoals SS-agar, XLD-agar, Hektoen-agar, onder anderen.

Voedselmonsters

Peptonwater wordt gebruikt als verrijkingsmedium of als eenvoudig verdunningsmiddel, maar als salmonellasoorten worden gezocht, wordt het gebruikt als voorverrijkingsmedium, zoals reeds beschreven.

Ga bij voedsel als volgt te werk:

Weeg voor vast voedsel 25 g van het monster en voor vloeibaar voedsel 25 ml ervan. Doe de portie in kolven met 225 ml peptonwater. Meng en homogeniseer het monster.

Als wordt vermoed dat de microbiële belasting hoog is, kunnen seriële of decimale verdunningen worden gemaakt om het tellen van kolonievormende eenheden (CFU) te vergemakkelijken.

Het aantal verdunningen is afhankelijk van het type monster en de ervaring van de analist.

Als men daarentegen vermoedt dat de microbiële belasting erg laag is, is het niet nodig om verdunningen uit te voeren. Vervolgens subcultuur op selectieve media.

In het geval van voedsel uit de zee, zoals schaaldieren, vissen, onder andere op zoek naar Vibrio cholerae of andere soorten Vibrio, moet peptonwater worden gebruikt dat is ingesteld op pH 8,5 (alkalisch peptonwater).

QA

Van elke bereide batch moeten één tot twee buisjes zonder inoculatie gedurende 24 uur in aerobiose bij 37 ° C worden geïncubeerd. Aan het einde van de tijd mag er geen troebelheid of kleurverandering worden waargenomen.

Bekende controlestammen kunnen ook worden gebruikt om hun effectiviteit te evalueren:

Hiervoor kunnen de volgende bacteriestammen worden gebruikt: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

In alle gevallen wordt een bevredigende microbiële ontwikkeling verwacht, die wordt waargenomen door troebelheid van het medium.

Beperkingen

-Het gedehydrateerde medium is erg hygroscopisch, dus het moet uit de buurt van vocht worden gehouden.

-Het medium mag niet worden gebruikt als enige vorm van verslechtering wordt waargenomen.

-Het gedehydrateerde kweekmedium moet worden bewaard tussen 10 - 35 ° C

-Het bereide medium moet gekoeld bewaard worden (2-8 ° C).

Referenties

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B en Velázquez O. Technieken voor microbiologische analyse van voedingsmiddelen. 2009, 2e druk. Faculteit Chemie, UNAM. Mexico. Versie voor Handleidingen en Documenten Administrator (AMyD) van de Faculteit Chemie, UNAM 1. Beschikbaar op: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratories. Buffet pepton water. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Pepton water. Beschikbaar op: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Pepton water. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Gebufferd peptonwater. Beschikbaar op: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratoria. Alkalisch peptonwater. Beschikbaar op: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana SA Argentina.