XLD-AGAR: GRONDGEDACHTE, BEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De XLD-agar of Xylose Lysine desoxycholaat-agarmedium is een selectieve en differentiële vaste kweek voor isolatie van enteropathogenen. Taylor ontwierp de XL-agar (Xylose, Lysine) -formule om de isolatie van het Shigella-geslacht te verbeteren.

Hij merkte op dat dit geslacht werd geremd in de meeste media die bedoeld zijn voor de isolatie van enteropathogenen. Vervolgens werden natriumdeoxycholaat, natriumthiosulfaat en ferri-ammoniumcitraat toegevoegd om de selectiviteit te verhogen. Deze formule is nuttig gebleken voor zowel de isolatie van Shigella als Salmonella.

Verschillen tussen de kolonies van Shigella, Salmonella en coliformen op XLD-agar. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliformen. Bronnen: A. Door: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, Courtesy: Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Door: CDC / Dr. JJ boer, Courtesy: Public Health Image Library

XLD-agar is samengesteld uit gistextract, natriumdeoxycholaat, xylose, lysine, lactose, sucrose, natriumthiosulfaat, ijzerammoniumcitraat, natriumchloride, fenolrood en agar. XLD Agar en SS Agar duo worden in de meeste bacteriologische laboratoria gebruikt om fecale monsters te bestuderen op Shigella en Salmonella.

Andere laboratoria geven de voorkeur aan de combinatie van CHROMagar Salmonella en XLD-agar, naast andere beschikbare opties. Deze duo's kunnen worden bereid in dubbele petrischalen. Aan de ene kant plaatsen ze XLD-agar en aan de andere kant het andere gekozen medium.

Basis

-Nutritieve kracht

XLD-agar heeft gistextract, dat dient als voedingsbron voor de micro-organismen die op deze agar groeien. Bovendien levert de aanwezigheid van koolhydraten (xylose, sucrose en lactose) energie aan de bacteriën die ze kunnen fermenteren.

-Selectiviteit van het medium

Als remmende stof presenteert het natriumdeoxycholaat; Dit voorkomt de groei van Gram-positieve bacteriën, waardoor het medium een ​​selectief karakter krijgt.

-Differentiaal vermogen

Typische Shigella-kolonies

Zoals eerder vermeld, bevat XLD-agar xylose; Dit koolhydraat wordt gefermenteerd door alle bacteriën die in dit medium groeien, met uitzondering van het geslacht Shigella.

Dit is een van de kenmerken die het zijn differentiële karakter geven, aangezien de Shigella-kolonies zich van de rest onderscheiden door rode kolonies te ontwikkelen, terwijl de andere bacteriën gele kolonies produceren.

Typische kolonies van Salmonella

Het geslacht Salmonella fermenteert ook xylose en genereert aanvankelijk gele kolonies. Echter, nadat het koolhydraat xylose is uitgeput, valt het lysine aan vanwege zijn enzym lysine decarboxylase. De decarboxylering van lysine genereert alkaliën die de kleur van de kolonie en het omringende medium naar het oorspronkelijke rood veranderen.

Dit gedrag wordt alleen uitgevoerd door Salmonella, aangezien de coliformen die lysine decarboxyleren het medium niet alkaliseren. Dit komt omdat coliformen ook de aanwezige lactose en sucrose fermenteren; daarom is de productie van zuren erg hoog, waardoor de gele kolonie in deze bacteriën blijft.

Opgemerkt moet worden dat het Salmonella-geslacht geen sucrose of lactose fermenteert.

Productie van H

XLD-agar maakt ook detectie mogelijk van H ₂ S- producerende Salmonella-soorten ; Hiervoor vertrouwt het op de bron van zwavel vertegenwoordigd door natriumthiosulfaat en een reactieontwikkelaar, namelijk ijzerammoniumcitraat.

De laatste reageert met H ₂ S (kleurloos gas) en vormt een zichtbare onoplosbare zwarte neerslag ijzersulfaat. In die zin zullen de kenmerken van de salmonella-kolonies rood zijn met een zwart centrum.

Opgemerkt wordt dat voor de H ₂ S vormingsreactie optreden , een alkalische pH nodig. Dat is de reden waarom andere Enterobacteriaceae die H ₂ S vormen het niet of slecht kunnen doen in dit medium, aangezien de hoge zuurgraad geproduceerd door fermentatie van de aanwezige koolhydraten de reactie remt of belemmert.

-Natriumchloride, agar en fenolrood

Ten slotte handhaaft natriumchloride het osmotische evenwicht; agar is het stollingsmiddel en fenolrood detecteert pH-veranderingen, waardoor de kleur van de kolonies en het medium verandert.

Voorbereiding

Weeg 55 g gedehydrateerd XLD-medium af en los op in 1 liter water. Verhit en roer het mengsel tot het kookpunt bereikt. Oververhit niet, aangezien hitte het medium beschadigt en een neerslag creëert dat de morfologie van typische kolonies verandert.

Dit medium mag niet worden geautoclaveerd. Bij het oplossen moet het naar een waterbad van 50 ° C worden geleid. Bij afkoeling moet het direct op steriele petrischalen worden geserveerd. Ze kunnen in enkele borden of dubbele borden worden gegoten. Ze laten stollen en worden tot gebruik in de koelkast bewaard.

Tempereer voor gebruik. Omdat het een niet-steriel medium is, wordt aanbevolen het vlak voor de gebruiksdatum klaar te maken.

De uiteindelijke pH van het medium moet 7,4 ± 0,2 zijn. De kleur van het bereide medium is oranjerood, doorschijnend, zonder neerslag.

Als u Xylose Lysine (XL) -basisagar heeft, kunt u natriumdeoxycholaat, natriumthiosulfaat en ijzerammoniumcitraat toevoegen. Op deze manier wordt de XLD-agarformule verkregen.

Toepassingen

XLD-agar wordt gebruikt voor het herstel van enteropathogenen, voornamelijk van het geslacht Shigella en secundair van het geslacht Salmonella. Het is handig voor het beoordelen van ontlasting, water en voedselmonsters.

Soorten monsters

Ontlasting

Ontlastingmonsters kunnen rechtstreeks op XLD-agar worden gezaaid, waardoor het materiaal goed wordt verdeeld om geïsoleerde kolonies te verkrijgen.

Om het herstel van salmonella te verbeteren, kan XLD-agar worden verwijderd uit Salmonella-verrijkingsmedia.

Eten

In het geval van voedsel kunnen verrijkingsbouillon voor Salmonella en Shigella worden gebruikt. Voor Salmonella kun je onder andere selenietcystinebouillon, felgroene tetrathionaatbouillon gebruiken.

In het geval van Shigella kan het worden verrijkt met Shigella-bouillon met 0,5 µ / ml novobiocine, geïncubeerd bij 42 ° ± 1 ° C gedurende 16-20 uur.

Water

Bij wateranalyse wordt onder meer de membraanfiltratietechniek en het gebruik van XLD-agar aanbevolen.

Voorwaarden voor aanplant en identificatie

Het geënte medium wordt aëroob geïncubeerd bij 35 ° C gedurende 24 tot 48 uur.

De typische kolonies van elk geslacht worden waargenomen, de verdachte kolonies moeten biochemische tests ondergaan om ze te identificeren.

QA

Om de kwaliteitscontrole van het medium te evalueren, kunnen de volgende bacteriestammen worden gebruikt: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Het geslacht Salmonella wordt gekenmerkt door het presenteren van rode kolonies met een zwart centrum of volledig zwarte kolonies op dit medium. Terwijl in het geslacht Shigella de kolonies rood moeten zijn, dat wil zeggen de kleur van het medium.

In het geval van Escherichia coli wordt verwacht dat het geheel of gedeeltelijk wordt geremd; als het groeit, zijn de kolonies geel. Voor Proteus mirabilis wordt een slechte groei verwacht met roze kolonies met of zonder een zwart centrum. Uiteindelijk zal het geslacht Klebsiella groeien als gele kolonies.

Laatste gedachten

XLD-agar wordt veel gebruikt in bacteriologische laboratoria vanwege zijn hoge efficiëntie voor het herstel van Shigella en heeft ook een goed herstel van het Salmonella-geslacht.

Rall et al. (2005) toonden in hun werk getiteld "Evaluation of three verrijkingsbouillon en vijf vaste media voor de detectie van Salmonella bij pluimvee" aan dat van de 3 geteste klassieke media (heldergroene agar, SS-agar en XLD-agar) XLD-agar had het beste herstelpercentage.

De herstelpercentages waren als volgt: 13,8% voor heldergroene agar, 27,6% voor SS en 34,5% voor XLD. Rambach-agar met 48% herstel en CHROMagar met 79,3% werd alleen overtroffen door chromogene media.

Referenties

1. Door voedsel overgedragen ziekten. Shigellose. Beschikbaar op: anmat.gov.ar
2. "XLD-agar." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 9 februari 2019, 11:46 UTC. 10 april 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL Laboratoria. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (tweedelige). 2013 Beschikbaar op: bd.com
4. Lab Neogen. XLD-agar. Verkrijgbaar bij: foodsafety.neogen
5. Laboratorium Francisco Soria Melguizo. XLD-agar. Beschikbaar op: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Evaluatie van drie verrijkingsbouillon en vijf uitplaatmedia voor salmonella-detectie bij pluimvee. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Beschikbaar vanaf: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana SA Argentina.