- Basis
- Nutriëntenvoorziening
- Selectief vermogen
- Differentiële kracht
- Osmotisch evenwicht en stollingsmiddel
- Voorbereiding
- Kaliumtellurietoplossing 1% w / v
- Vogel-Johnson Agar Base Medium
- Gebruik
- QA
- Referenties
De agar Vogel-Johnson is een vaste medium selectieve en differentiële kweek, speciaal samengesteld voor de isolatie van Staphylococcus aureus. Dit medium werd in 1960 gecreëerd door Vogel en Johnson uit de modificatie van tellurietglycine-agar, geformuleerd in 1955 door Zebovitz, Evans en Niven.
De modificatie bestond uit het verhogen van de concentratie mannitol aanwezig in het medium en het opnemen van een pH-indicator. De huidige formule is samengesteld uit tripteïne, gistextract, mannitol, dikaliumfosfaat, lithiumchloride, glycine, fenolrood, agar, 1% kaliumtellurietoplossing en water.
Bron: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.
Opgemerkt moet worden dat er andere media zijn die, zoals Vogel-Johnson-agar, selectief zijn voor de isolatie van S. aureus, zoals zoute mannitol-agar en Baird Parker-agar. In die zin zou kunnen worden gezegd dat de basis van Vogel-Johnson-agar een mengsel is van zoute mannitol-agar en Baird Parker-agar.
In de eerste worden de S. aureus-kolonies onderscheiden door de mannitol te fermenteren en de pH-indicator geel te maken. Aan de andere kant, in de tweede, wordt S. aureus gekenmerkt door het reduceren van telluriet tot telluur en het vormen van grijze tot zwarte kolonies. Beide eigenschappen worden waargenomen in Vogel-Johnson-agar.
Dit medium is, net als zijn tegenhangers, nuttig voor de detectie van Staphylococcus aureus in voedselmonsters, hygiënische controles van industriële producten en in klinische monsters.
Basis
Nutriëntenvoorziening
Vogel-Johnson medium bevat tripteïne en gistextract; Beide stoffen leveren aminozuren met een lange keten die dienen als bronnen van koolstof en stikstof die nodig zijn voor bacteriegroei. Bacteriën die in dit medium kunnen groeien, nemen de voedingsstoffen uit deze stoffen op.
Selectief vermogen
Vogel-Johnson-agar is in staat de groei van Gram-negatieve bacteriën en zelfs sommige Gram-positieve bacteriën te remmen, wat de ontwikkeling van coagulase-positieve stafylokokken bevordert. De remmende stoffen zijn kaliumtelluriet, lithiumchloride en glycine.
Differentiële kracht
De stoffen die dit differentiële medium maken, zijn mannitol en kaliumtelluriet. Mannitol is een koolhydraat en wanneer het wordt gefermenteerd, worden er zuren geproduceerd die het medium van rood naar geel doen veranderen, wat gebeurt dankzij de aanwezigheid van de rode fenol-pH-indicator.
Terwijl het kleurloze telluriet, wanneer het wordt gereduceerd tot vrij metallisch tellurium, een donkergrijze tot zwarte kleur krijgt.
Staphylococcus aureus fermenteert mannitol en reduceert telluriet tot tellurium. Om deze reden zijn de typische kolonies van S. aureus in dit medium grijs of zwart omgeven door een geel medium.
Bacteriën die in dit medium groeien en telluriet of mannitol niet reduceren, zullen transparante kolonies vormen, omgeven door een rood gekleurd medium, zelfs intenser dan de oorspronkelijke kleur, vanwege de alkalisatie van het medium door het gebruik van peptonen.
Aan de andere kant zullen bacteriën die telluriet reduceren maar mannitol niet fermenteren groeien als grijze of zwarte kolonies omgeven door een dieprode medium.
Als het medium zou worden bereid zonder toevoeging van kaliumtelluriet, zouden S. aureus-kolonies zich ontwikkelen als gele kolonies, omgeven door geel medium, zoals in zoute mannitol-agar.
Osmotisch evenwicht en stollingsmiddel
Dikaliumfosfaat handhaaft de osmotische balans van het medium en past de pH aan tot neutraal 7.2. Terwijl de agar de vaste consistentie aan het kweekmedium geeft.
Voorbereiding
Kaliumtellurietoplossing 1% w / v
Deze oplossing zit niet in het gedehydrateerde medium, aangezien het niet in een autoclaaf gesteriliseerd kan worden. Om deze reden wordt het apart bereid en toegevoegd aan het reeds gesteriliseerde medium.
Sommige commerciële huizen verkopen de gebruiksklare 1% kaliumtellurietoplossing. Als u zich in het laboratorium wilt voorbereiden, gaat u als volgt te werk:
Weeg 1,0 g kaliumtelluriet af en meet 100 ml gedestilleerd water af. Los de kaliumtelluriet op in een deel van water en vul dan de hoeveelheid water aan tot 100 ml. Steriliseer de oplossing door middel van filtratiemethode.
Vogel-Johnson Agar Base Medium
Weeg 60 gram van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Het mengsel wordt aan de kook gebracht om volledige oplossing te bevorderen. Tijdens het oplossingsproces wordt het medium regelmatig geroerd.
Steriliseer in autoclaaf bij 15 pond druk en 121 ° C gedurende 15 minuten. Haal uit de autoclaaf en laat het rusten tot het medium een temperatuur van ongeveer 45 tot 50 ° C bereikt. Voeg 20 ml van de eerder bereide 1% kaliumtellurietoplossing toe.
Meng en giet in steriele petrischalen. Laat stollen en bestel omgekeerd op bordenhouders om later tot gebruik in de koelkast te bewaren.
De uiteindelijke pH van het voorbereide medium moet 7,2 ± 0,2 zijn.
Wacht tot de plaat op kamertemperatuur is gekomen voordat u een monster zaait.
De kleur van het voorbereide medium is rood.
Gebruik
Hoewel het kan worden gebruikt voor de isolatie van S. aureus in elk type monster, wordt het voornamelijk gebruikt voor de microbiologische analyse van farmaceutische producten, cosmetica en voedsel.
Het wordt aanbevolen dat het inoculum dicht is. Het zaaien kan worden gedaan door te scoren met een platina-handvat of door het oppervlak met een Drigalski-spatel.
Platen worden gedurende 24 tot 48 uur aerobiose bij 35-37 ° C geïncubeerd.
QA
De volgende controlestammen kunnen worden gebruikt om kwaliteitscontrole uit te voeren op Vogel-Johnson-medium:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 of Proteus mirabilis ATCC 43071.
Het verwachte resultaat is als volgt: voor S. aureus-stammen bevredigende groei met zwarte kolonies omgeven door geel medium. Voor S. epidermidis regelmatige groei met doorschijnende of zwarte kolonies omgeven door rood medium.
Evenzo wordt totale remming verwacht voor E. coli en gedeeltelijke of totale remming voor Proteus mirabilis; als het groeit, zal het dat spaarzaam doen en zullen de kolonies zwart zijn omgeven door een rode kleur.
Referenties
- BD Laboratoria. VJ (Vogel en Johnson Agar). 2006 Beschikbaar op: bd.com
- Britannia Laboratories. Vogel-Johnson Agar. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
- Britannia Laboratories. Kaliumtelluriet. 2015 Beschikbaar op: britania.com
- Himedia-laboratorium. Vogel-Johnson Agar Medium. 2018 Beschikbaar op: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
- Vogel- Johnson Agar Base. Merck Microbiology Manual. 12e editie, pp 502-503. Beschikbaar op: Users / Team / Downloads
- Wikipédia-bijdragers, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia, een gratis encyclopedie, beschikbaar op: wikipedia.org.
- Venezolaanse Standard Covenin 1292-89. (1989). Voedingsmiddelen. Isolatie en opsomming van Staphylococcus aureus. Beschikbaar op: sencamer.gob.ve