THAYER MARTIN AGAR: FOUNDATION, VOORBEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De agar Thayer Martin het is een zeer voedzaam en solide selectief medium voor de isolatie van Neisseria meningitidis en Neisseria gonorrhoeae; beide bekend als pathogene of klinisch belangrijke Neisseria's.

Een van de belangrijkste bijzondere kenmerken van Thayer Martin Agar is het hoge gehalte aan voedingssupplementen. Deze eigenschap is essentieel, omdat Neisseria's vanuit voedingsoogpunt zeer veeleisende micro-organismen zijn en daarom niet in gewone media groeien.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin zakelijk medium. Bronafbeelding 1: genomen door de auteur MSc. Marielsa Gil, afbeelding 2. Pixinio.com bacteriën gekoloniseerd, gemodificeerd, Thayer, Martin, agar.

Aan de andere kant, aangezien deze micro-organismen normaal in niet-steriele gebieden worden aangetroffen, is de toevoeging van remmers noodzakelijk om de groei van de begeleidende flora te voorkomen, zonder de ontwikkeling van het geslacht Neisseria te beïnvloeden.

Deze agar is samengesteld uit GC-basisagar, hemoglobine, aanvullende voedingssupplementen en een complex van remmende stoffen (antibiotica en antischimmelmiddelen). De commerciële huizen verkopen elk van de supplementen afzonderlijk.

Het monster dat in dit medium wordt gezaaid, is afhankelijk van het micro-organisme dat wordt gezocht. Voor Neisseria gonorrhoeae zijn de ideale exemplaren vaginale en urethrale afscheidingen. Terwijl voor Neisseria meningitidis de meest gebruikte monsters CSF, faryngeale en nasofaryngeale exsudaten zijn.

Basis

Neisseria's zijn micro-organismen die als hinderlijk worden geclassificeerd en daarom is hun isolatie moeilijk. Daarom is Thayer Martín een complex medium en elk van zijn componenten vervult een functie die hieronder wordt uitgelegd:

GC-basisagar

GC-agar bevat proteose pepton, maïszetmeel, natriumchloride, dikaliumfosfaat, monokaliumfosfaat en agar-agar. De componenten bieden de basisvoedingsstoffen voor microbiële ontwikkeling, neutraliseren giftige vetzuren, helpen het osmotische evenwicht te behouden, bepalen de pH en zorgen voor een vaste consistentie van het medium.

Hemoglobine

Hemoglobine levert factoren V en X (respectievelijk nicotinamide-adenine-dinucleotide NAD en hemine). Om deze reden groeien Haemophilus-soorten ook in dit medium. Hemoglobine kan commercieel worden verkregen in gedehydrateerde vorm of vers gedefibrineerd runderbloed kan aan het medium worden toegevoegd.

Verrijkingssupplement

Aan de andere kant moet ook een verrijkingssupplement worden toegevoegd aan het Thayer-Martin-medium, omdat de voedingsstoffen in de basisagar niet voldoende zijn voor de vereisten van het geslacht Neisseria.

Het meest gebruikte verrijkingssupplement heet isovitalex. Het bevat glutamine, adenine, NAD, cocarboxylase, guanine, ijzernitraat, p-aminobenzoëzuur, vitamine B12, thiamine en glucose. Al deze verbindingen zijn nodig voor de juiste ontwikkeling van pathogene Neisseria's.

Remmers

Omdat het een zeer voedzaam medium is, moeten remmers worden gebruikt die de groei van micro-organismen uit de gebruikelijke flora van het gebied voorkomen en zo de isolatie van het geslacht Neisseria bevorderen.

Het remmercomplex is samengesteld uit vancomycine, colistine en nystatine. Vancomycine remt de groei van grampositieve bacteriën, colistine voorkomt de groei van gramnegatieve bacteriën zoals Pseudomonas en sommige saprofytische Neisseria's, en nystatine werkt in op gisten zoals Candida albicans.

Thayer Martin Agar werd later echter gewijzigd; de veranderingen bestonden uit de toevoeging van trimethoprim, de toename van de hoeveelheid agar en de toevoeging van extra glucose. Deze veranderingen hebben het herstel van Neisseria gonorrhoeae-soorten aanzienlijk verbeterd.

Opgemerkt moet worden dat trimethoprim de groei van het geslacht Proteus en de daaruit voortvloeiende zwermvorming remt. In die zin zijn het de antibiotica die het selectieve karakter geven aan het Thayer Martin-medium.

Voorbereiding

Originele Thayer Martin-agar

-GC-agar

Weeg 8,2 g gedehydrateerd GC-medium af en suspendeer in 100 ml. Meng en kook gedurende 1 minuut onder regelmatig roeren om volledig op te lossen. Steriliseer het mengsel gedurende 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ° C.

- 2% hemoglobine

Suspendeer 2 g gedehydrateerde hemoglobine in 2 of 3 ml heet gedestilleerd water tot een uniform mengsel is gevormd. Voeg beetje bij beetje meer water toe om een ​​volume van 100 ml te bekomen. De suspensie moet homogeen zijn alvorens te steriliseren.

Steriliseer gedurende 15 minuten in een autoclaaf.

-Verrijkingssupplement

Reconstitueer de commerciële injectieflacon met het verdunningsmiddel dat door hetzelfde commerciële bedrijf wordt geleverd. Meng goed. De hoeveelheid te gebruiken verdunningsmiddel wordt vermeld in de instructies van de kit.

-VCN-remmersupplement (vancomycine, colistine, nystatine)

Reconstitueer de injectieflacon met het verdunningsmiddel dat door het commerciële bedrijf wordt geleverd. Meng goed. De hoeveelheid te gebruiken verdunningsmiddel wordt vermeld in de instructies van de kit.

-Bereid

Ga als volgt te werk voor elke 100 ml GC-agar:

Laat de GC-agar de autoclaaf afkoelen tot een temperatuur van ongeveer 50 ° C en voeg 2 ml van de bereide hemoglobine-oplossing, 2 ml van het verrijkingssupplement (isobitalex of britalex) en 2 ml van het remmingssupplement toe. Mix en serveer in steriele petrischalen.

Laat stollen en bewaar in de koelkast tot gebruik.

De kleur van het voorbereide medium is kersenrood. De uiteindelijke pH van het medium is 7,2 ± 0,2

Gemodificeerde Thayer Martin-agar

Weeg 8,2 g gedehydrateerd GC-medium af en suspendeer in 100 ml. Voeg 1 g agar-agar toe en voeg 0,3 g glucose toe. Meng en kook gedurende 1 minuut onder regelmatig roeren om volledig op te lossen. Steriliseer het mengsel gedurende 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ° C.

Bereid het hemoglobine- en verrijkingssupplement voor zoals eerder beschreven.

Het gebruikte suppressiesupplement is VCNT (vancomycine, colistine, nystatine, trimethoprim).

-Bereid

Ga verder zoals beschreven voor de originele Thayer Martin-agar.

Gebruik

Thayer Martin Agar moet de gelegenheid krijgen om op te warmen voordat de exemplaren worden gestreept. Veelgebruikte monsters zijn faryngeale uitstrijkjes, neusuitstrijkjes, vaginale, urethrale en / of rectale afscheiding en liquor.

Gebruik verse monsters en maak sterke inocula op de agar. De monsters worden direct gezaaid door materiaalafvoer en vervolgens wordt uitputting op het oppervlak gestreept.

De platen worden geïncubeerd bij 35-37 ° C gedurende 24-48 uur in een microaerofiele pot (5% CO ₂ ). Aan het einde van de incubatietijd worden de platen onderzocht op kleine, grijze en soms mucoïde ogende kolonies.

Voer gram- en bevestigende biochemische tests uit op verdachte kolonies.

QA

De volgende microbiële stammen kunnen worden gebruikt voor kwaliteitscontrole van Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 en Neisseria meningitidis ATCC 13090; bij beide stammen wordt een bevredigende ontwikkeling verwacht.

De volgende stammen moeten ook worden opgenomen: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 en Candida albicans ATCC 10231. In alle gevallen wordt een totale of gedeeltelijke remming in dit medium verwacht.

Beperkingen

-We moeten er rekening mee houden dat bacteriën die resistent zijn tegen de gebruikte remmers in het medium kunnen groeien.

-Er zijn stammen van Neisseria gonorrhoeae die gevoelig kunnen zijn voor de gebruikte concentratie vancomycine. Om deze reden wordt aanbevolen om chocolade-agar te gebruiken, aangevuld met isovitalex, maar zonder remmers.

-Er zijn giststammen die resistent zijn tegen nystatine die in dit medium kunnen groeien en de isolatie van pathogene Neisseria's, met name gonokokken, kunnen verstoren.

Referenties

1. Diagnostische laboratoria van Valtek. Thayer-Martin Agar.2016. Beschikbaar op: com
2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Medium gewijzigd. 2010. Beschikbaar op: britanialab.com
3. Wikipedia-bijdragers. Thayer-Martin-agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 26 oktober 2017, 16:33 UTC. Beschikbaar op: wikipedia.org 4. Toegang tot 28 februari 2019.
4. Britannia Laboratories. GC-agar. 2010. Beschikbaar op: britanialab.com.
5. Laboratories BBL ™ Medium Verrijking voor veeleisende micro-organismen. 1999. Beschikbaar op: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana SA Argentina.