De bismutsulfietagar is een vaste medium selectieve en differentiële kweek, speciaal ontwikkeld voor isolatie van Salmonella enterica ondersoort enterica serotype Typhi, naast andere soorten Salmonella. Het medium staat bekend als BSA-agar vanwege het acroniem in het Engels Bismuth Sulfite Agar.
De oorspronkelijke formule voor bismutsulfietagar werd in 1927 gecreëerd door Wilson en Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); het bevatte natriumsulfiet, glucose, bismutoplossing, ammoniumcitraat, ferrosulfaat en agar-agar.
Groei van 48 uur incubatie van Salmonella sp op bismutsulfietagar. Bron: Pixnio.com Auteur: Dr. WR Erving, USCDCP
Tegenwoordig is er een wijziging van het oorspronkelijke medium, bestaande uit vleesextract, vlees- en caseïnepeptonen, bismutsulfietindicator, glucose, dinatriumfosfaat, ferrosulfaat, heldergroen en agar-agar.
Er zijn veel manieren om Salmonella-soorten te isoleren, maar als het gaat om het terugwinnen van het Typhi-serotype, heeft bismutsulfietagar een opmerkelijk voordeel ten opzichte van hen, aangezien in de meeste gevallen een zeer laag of geen herstel van dit micro-organisme wordt verkregen. .
Het is echter nodig om meer dan één type medium te gebruiken bij het isoleren van enteropathogenen, omdat bismutsulfietagar minder effectief is voor andere soorten Salmonella en voor het geslacht Shigella, die geremd of zeer slecht ontwikkelen. in deze agar.
Opgemerkt moet worden dat van alle Salmonella-soorten het Typhi-serotype een van de belangrijkste enteropathogenen bij de mens is, aangezien dit het enige reservoir is. Deze serovar veroorzaakt buiktyfus, gastro-enteritis, bacteriëmie en bloedvergiftiging.
Om deze reden is het relevant om deze agar op te nemen bij het analyseren van water, uitwerpselen of voedselmonsters waarvan de aanwezigheid wordt vermoed.
Basis
Zoals de meeste kweekmedia, bevat bismutsulfietagar voedingsstoffen om bacteriegroei te bevorderen, zoals peptonen en vleesextract. Evenzo functioneert glucose als een bron van energie en koolstof.
Niet alle bacteriën zullen echter op dit medium groeien, aangezien bismutsulfietagar een selectief medium is. Het bevat verbindingen die de groei van grampositieve micro-organismen en bepaalde gramnegatieve bacteriën remmen. Deze verbindingen zijn: de indicator bismutsulfiet en heldergroen.
Dinatriumfosfaat van zijn kant handhaaft de osmolariteit en pH van het medium.
Bovendien bismuth sulfiet agar is een differentiële medium dankzij de aanwezigheid van ferrosulfaat, die de vorming toont van H 2 S. De H 2 S gevormd door bacteriën reageert met ijzersulfaat en vormt een duidelijk zichtbare onoplosbaar zwart precipitaat.
Ten slotte zorgt de agar-agar voor de vaste consistentie van het medium.
Voorbereiding
Weeg 52,3 g van het gedehydrateerde medium af en los op in een liter water. Verwarm het mengsel gedurende 1 minuut onder regelmatig roeren tot het volledig is opgelost. Oververhit niet te veel. Dit medium is niet autoclaveerbaar, omdat extreme hitte het kweekmedium beschadigt.
Laat afkoelen tot 45 ° C en schud voor het serveren in steriele petrischalen. Het wordt aanbevolen om platen met een goede dikte te maken. Om dit te doen, moet 25 ml op elk bord worden gegoten. Laat stollen. Aangezien het een medium is dat niet is gesteriliseerd, is het normaal dat het onmiddellijk wordt aanbevolen.
Een studie uitgevoerd door D'aoust in 1977 toonde echter aan dat er een beter herstel is van Salmonella typhimurium en Salmonella enteritidis naarmate de bismutsulfietagar medium veroudert, wat de prestatie van de serovars Typhi en Paratyphi B niet beïnvloedt.
D'aoust raadt aan om de platen op dag 4 van de koeling te gebruiken, hoewel het waarschuwt dat naarmate het medium ouder wordt, de selectiviteit afneemt en Proteus vulgaris-stammen zich gemakkelijker ontwikkelen.
Om deze reden verdient het voor sterk verontreinigde monsters, zoals uitwerpselen, de voorkeur om vers bereid medium te gebruiken. Anders gebruiken op dag 4 van de bereiding. Andere auteurs raden aan om de borden de dag na hun bereiding te gebruiken, bewaard in de koelkast.
Gekoelde platen moeten voor gebruik worden getemperd. De pH van het medium moet 7,5 ± 0,2 zijn. Het ruwe medium is beige en het voorbereide medium is groenachtig grijs opaalachtig.
Toepassingen
Onder de monsters die in dit medium kunnen worden geplant, zijn monsters van feces, drink- of afvalwater en voedsel.
Om de isolaten te verbeteren, wordt aanbevolen om een voorverrijkingsbehandeling uit te voeren met lactosebouillon en na verrijking met tetrathionaatbouillon of cystineselenietbouillon, alvorens op bismutsulfietagar te zaaien.
De platen worden gedurende 24 tot 48 uur bij 35 ° C ± 0,2 geïncubeerd in aerobiose.
Kenmerken van de kolonies op bismutsulfietagar
Salmonella Typhi-kolonies worden meestal binnen 24 uur op deze agar gezien met een zwart centrum en omgeven door een heldergroene halo. Terwijl ze in 48 uur volledig zwart worden door de vorming van waterstofsulfide.
-Dit medium remt de meeste soorten van het geslacht Shigella.
- S. Typhi en S. arizonae kunnen zeer vergelijkbare kolonies geven.
-De coliformen dat produceren H 2 S, zoals Proteus en Citrobacter produceren kolonies vergelijkbaar met die van Salmonella, zodat het noodzakelijk is het uitvoeren van biochemische worden bepaald.
-Een goede strepen moeten worden uitgevoerd om geïsoleerde kolonies te verkrijgen; Het is de enige manier om de typische kenmerken van kolonies van het geslacht Salmonella te observeren.
QA
Voor de steriliteitscontrole wordt een niet-geïnoculeerde plaat bij 37 ° C geïncubeerd, er wordt verwacht dat er geen groei of kleurverandering zal zijn.
Voor kwaliteitscontrole, bekende soorten zoals:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Escherichia coli en Shigella flexneri worden naar verwachting gedeeltelijk geremd door respectievelijk groenachtig bruine en bruine kolonies te ontwikkelen. Terwijl beide salmonella's een uitstekende ontwikkeling moeten hebben met zwarte kolonies met metaalglans, en tenslotte Enterococcus faecalis volledig moet worden geremd.
Referenties
- Wilson, W., en EM McV. Blair. Gebruik van een glucose-bismutsulfiet-ijzermedium voor de isolatie van B. typhosus en B. proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Opgehaald van .jstor.org
- D'aoust JY. Effect van opslagomstandigheden van de prestaties van bismutsulfietagar. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122-124. Beschikbaar in: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD Laboratoria. Bismut-sulfietagar volgens WILSON-BLAIR. 2009. Beschikbaar op: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Himedia Laboratoria. Bismutsulfietagar. 2017 Beschikbaar op: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G en Ybarra M. Bacteriologische kwaliteit van rauwe geitenmelk geproduceerd in Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54