TRYPTICASEÏNE-SOJA-AGAR: GRONDGEDACHTE, BEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De soja-agar-trypton of trypticase-soja-agar is een vast kweekmedium en is qua voedingswaarde niet-selectief. Het wordt aangeduid met de letters TSA voor het acroniem in het Engels Trypticase Soy Agar. Het is samengesteld uit tripteïne, soja-pepton, natriumchloride en agar-agar.

Vanwege zijn hoge voedingskracht is het ideaal voor de kweek van matig veeleisende en niet-veeleisende micro-organismen. Medium zonder aanvullende supplementen wordt niet aanbevolen voor primaire culturen, maar het is erg handig voor het subculturen van pure soorten en ze levensvatbaar te houden, naast andere toepassingen.

Trypticaseïne-soja-agarwiggen in buisjes met bakelieten dop. Bron: foto gemaakt door de auteur MSc. Marielsa Gil.

Deze agar dient ook als basis voor de bereiding van verrijkte media zoals bloedagar, vooral wanneer het nodig is om de hemolysepatronen te observeren en om de optoquine- en bacitracine-taxa te monteren, vereist bij de diagnose van respectievelijk Streptococcus pneumoniae en Streptococcus pyogenes.

Aan de andere kant is het in combinatie met antibiotica nuttig om klinisch belangrijke facultatieve en strikt anaërobe micro-organismen te isoleren uit monsters met gemengde flora.

Ten slotte voldoen de samenstelling en de prestaties van trypticaseïne-soja-agar aan de vereisten van de verschillende farmacopeeën (Europees, Japans en Noord-Amerikaans).

Basis

Voor een goede ontwikkeling van bacteriën is de aanwezigheid van energievoorraden noodzakelijk, zoals aminozuren, vitamines, pure en pyrimidische basen.

In die zin leveren tripteïne en soja-pepton deze voedingsstoffen aan micro-organismen, waardoor ze zich volledig kunnen ontwikkelen. Voor kieskeurige bacteriën is het echter noodzakelijk om deze agar aan te vullen met gedefibrineerd bloed of opgewarmd bloed om de verrijking ervan te verhogen.

Aan de andere kant, als antibiotica aan het medium worden toegevoegd, wordt het een selectief medium. 0,6% gistextract kan ook worden toegevoegd om de isolatie van soorten van het geslacht Listeria te bevorderen, terwijl de toevoeging van cystinetelluriet en lamsbloed ideaal is voor Corynebacterium diphteriae.

Ten slotte zorgt het natriumchloride voor de osmotische balans van het medium en de agar zorgt voor de vaste consistentie.

Voorbereiding

Trypticaseïne-soja-agarplaten

Om trypticaseïne-soja-agar te bereiden, moet 40 g van het gedehydrateerde commerciële medium op een digitale weegschaal worden gewogen. Het wordt opgelost in een liter gedestilleerd water in een kolf.

Het mengsel wordt 5 minuten met rust gelaten en daarna naar een warmtebron gebracht om het medium te helpen oplossen. Het moet regelmatig worden geroerd en 1 tot 2 minuten worden gekookt. Vervolgens wordt het medium 15 minuten gesteriliseerd in de autoclaaf bij 121 ° C.

Laat afkoelen tot 50 ° C en verdeel over steriele petrischalen. Laten stollen, omkeren, in plaqueros bestellen en in de koelkast bewaren.

De uiteindelijke pH van het medium moet 7,3 ± 0,2 zijn.

Opgemerkt moet worden dat de kleur van het gedehydrateerde kweekmedium lichtbeige is en moet worden bewaard tussen 10 en 35 ° C, op een droge plaats.

De bereide agar van zijn kant is licht amberkleurig. Bereide borden moeten tot gebruik in de koelkast (2-8 ° C) worden bewaard.

Platen moeten vóór gebruik op kamertemperatuur komen.

Trypticasein soja-agarplaten aangevuld met bloed

Bloedagar wordt bereid door 5% gedefibrineerd bloed toe te voegen tijdens het afkoelen van de trypticaseïne-soja-agar tot 50 ° C. Het mengsel wordt gehomogeniseerd door met zachte bewegingen te roteren.

Serveer in steriele petrischalen. De middelste kleur moet kersenrood zijn.

Trypticasein soja-agarplaten aangevuld met opgewarmd bloed

Om de op TSA gebaseerde bloedagar te bereiden, gaat u op dezelfde manier te werk als de reeds beschreven procedures, maar wanneer u de autoclaaf verlaat, laat u deze rusten tot de temperatuur van het medium ongeveer 56 tot 70 ° C is. Op dat moment wordt het bloed geplaatst en gemengd totdat het medium bruin wordt.

Serveer in steriele petrischalen. De kleur van het medium is chocoladebruin.

Trypticaseïne Soja Agar Wedges

De agar-bereidingsprocedure is dezelfde als die beschreven voor borden, met het verschil dat in plaats van het medium op petrischalen te serveren, het wordt verdeeld over 10 tot 12 ml in buizen met bakelieten deksels voordat het wordt gesteriliseerd.

Vervolgens worden de buisjes gedurende 15 minuten geautoclaveerd bij 121 ° C. Wanneer ze vertrekken, worden ze met behulp van een steun geneigd en mogen ze stollen.

De voorbereide wiggen worden per oppervlak gezaaid en dienen om bepaalde niet-veeleisende micro-organismen gedurende een bepaalde tijd levensvatbaar te houden.

Toepassingen

Trypticaseïne Soja Agar wordt gebruikt in de volgende gevallen:

-Als basis voor de bereiding van de klassieke bloedagar die in de meeste laboratoria routinematig wordt gebruikt.

-De isolatie van veeleisende bacteriën.

-Observatie van het hemolysepatroon.

-Uitvoeren van diagnostische tests.

-Als basis voor het bereiden van speciale bloedagar voor Corynebacterium diphteriae, met cystinetelluriet en lamsbloed.

-Als basis om lamsbloedagar te bereiden, plus kanamycine-vancomycine voor de groei van anaëroben, vooral Bacteroides sp.

- Voor het onderhoud van niet-veeleisende stammen (Bacterioteca).

- Aëroob kiemgetal bij de studie van de microbiële limiet van water-, milieu-, voedsel- en cosmetische monsters.

Gezaaid

Monsters kunnen rechtstreeks op het oppervlak van trypticaseïne-soja-agar worden gezaaid, aangevuld met bloed of andere toevoegingen. Het wordt gezaaid door uitputting.

Terwijl trypticaseïne-soja-agarplaten zonder toevoegingen over het algemeen worden gebruikt om microbiële stammen (bacteriën of gist) te subculturen.

QA

Steriliteitscontrole

Om de steriliteit van de verschillende media die met trypticaseïne-soja-agar zijn bereid, te controleren, wordt aanbevolen om het volgende te doen: van elke bereide batch moeten 1 of 2 niet-geënte platen of buisjes 24 uur bij 37 ° C worden geïncubeerd om hun steriliteit aan te tonen. In alle gevallen moet het zonder groei blijven.

Als er een besmetting wordt gevonden, moet de hele batch worden weggegooid.

Groeicontrole

De volgende bacteriestammen kunnen worden gebruikt om de goede werking van trypticaseïne-soja-agar te bestuderen: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 en Enterococcus faecalis ATCC 29212.

De stammen worden gezaaid en aëroob geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 24 uur.

De groei moet in alle gevallen bevredigend zijn.

Schimmels zoals Candida albicans Complex ATCC 10231 en Aspergillus niger ATCC 16404 kunnen ook worden gebruikt. Voor beide stammen wordt een goede groei verwacht.

Groeicontrole en hemolysepatroon van trypticaseïne-soja-agar aangevuld met bloed

Om de goede werking van de met deze basis bereide bloedagar te verifiëren, kunnen de volgende stammen worden gebruikt: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 en Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Ze worden gezaaid en 24 uur bij 37 ° C in micro-aerofiliciteit geïncubeerd.

In alle gevallen moet de groei bevredigend zijn, rekening houdend met het feit dat bèta-hemolyse (lichte halo rond de kolonie) moet worden waargenomen in S. pyogenes en alfa-hemolyse (groenachtige halo rond de kolonie) moet worden waargenomen in beide stammen van S. pneumoniae. kolonies).

Referenties

1. Wikipedia-bijdragers. Trypticase Ik ben agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 17 december 2018, 15:47 UTC. Beschikbaar op: https://en.wikipedia.org
2. Britannia Laboratories. Triptein soja-agar. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Tryptische soja-agar. Beschikbaar op: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Argentinië. Redactioneel Panamericana SA
5. BD Laboratoria. Trypticase Ik ben Agar. 2014 Beschikbaar op: .bd.com