Het mannitolzout-agar- of manitolzout is een vaste medium selectieve en differentiële cultuur. Het is gemaakt door Chapman voor het isoleren van pathogene Gram-positieve kokken, vooral Staphylococcus aureus.
Het is echter ook nuttig om Staphylococus epidermidis, die soms aanwezig kan zijn als opportunistisch pathogeen, en Staphylococcus saprophyticus, een erkend urinair pathogeen, naast andere soorten te isoleren.
A. Fiola met bereid zoute mannitol-agarmedium. B. Gezouten mannitol-agarplaten bezaaid met fermenterende en niet-fermenterende mannitol-bacteriestammen. Bron: A en B: Foto's gemaakt door de auteur MSc. Marielsa Gil.
Sommige Enterococcus kunnen op dit medium groeien, evenals bepaalde Gram-positieve sporenvormende staafjes.
Dit medium is zeer nuttig bij de analyse van klinische monsters, maar het wordt ook gebruikt bij de microbiologische studie van voedsel en bij de kwaliteitscontrole van industriële producten, zoals cosmetica en medicijnen.
Salty Mannitol Agar is samengesteld uit extracten en peptonen van rundvlees, tripteïne, mannitol, natriumchloride, fenolrood en agar.
Basis
Mannitol-agar is selectief dankzij de hoge zoutconcentratie. Zoutgehalte werkt als een remmende stof en voorkomt de groei van gramnegatieve bacteriën.
Het is ook verschillend vanwege de aanwezigheid van het koolhydraatmannitol en de fenolrood pH-indicator. Hieruit produceren de bacteriën die mannitol kunnen fermenteren zuren, waardoor het medium wordt verzuurd, de koloniën en het medium geel worden.
Aan de andere kant groeien kolonies die mannitol niet fermenteren in het medium en nemen de voedingsstoffen op die worden geleverd door vleesextracten en peptonen en tripteïne. Van daaruit halen de bacteriën de koolstof, stikstof, vitamines en mineralen die nodig zijn voor hun groei.
De kolonies kunnen in dit geval zwak of sterk roze zijn en het medium blijft dezelfde kleur of verandert in fuchsia.
Agar is de stof die de consistentie aan het medium geeft.
Voorbereiding
Om een liter zoute mannitol-agar te bereiden, wordt 111 g van het gedehydrateerde medium van het geprefereerde commerciële bedrijf afgewogen en met een kolf opgelost in 1000 ml gedestilleerd water.
Warmte wordt toegepast onder regelmatig roeren van het medium om het oplossingsproces te verbeteren. Kook een minuut.
De kolf wordt gedurende 15 minuten bij 121 ° C in de autoclaaf geplaatst.
Verwijder aan het einde van de tijd het flesje uit de autoclaaf, laat het rusten en serveer tussen 15 en 20 ml op steriele petrischalen wanneer de temperatuur ongeveer 50 tot 55 ° C is.
Het is toegestaan om te stollen, omgekeerd in plaqueros te bestellen en tot gebruik in de koelkast te bewaren. Wacht tot de plaat op kamertemperatuur is voordat u een monster zaait.
De platen worden gezaaid door strepen of door het oppervlak te zaaien met een drigalski-spatel. De uiteindelijke pH van het voorbereide medium moet 7,4 ± 0,2 zijn
De kleur van het gedehydrateerde medium is lichtbeige en de kleur van het bereide medium is oranjerood.
Toepassingen
Door zijn hoge selectiviteit is dit medium ideaal voor het zaaien van monsters met gemengde flora waarin de aanwezigheid van Staphylococus aureus, als de belangrijkste ziekteverwekker van dit geslacht, wordt gezocht.
In die zin is een van de meest voorkomende toepassingen de microbiologische analyse van faryngeale exsudaten en nasale afvoermonsters, vooral om asymptomatische dragers van S. aureus te detecteren.
Sommige landen hebben deze analyse geïmplementeerd als een verplichte vereiste voor mensen die als voedselverkoper willen werken.
Deze controle voorkomt het samentrekken van mensen die drager zijn van S. aureus, waardoor massale voedselvergiftiging wordt voorkomen als gevolg van de consumptie van voedsel dat besmet is met stafylokokken-enterotoxine.
Het kan ook worden gebruikt bij het zaaien van onder meer wondinfecties, bloedkweken, liquor, bronchoalveolaire lavage.
Gezouten mannitolagar is nuttig voor het opnieuw isoleren van kolonies uit urinekweken van CLED-agar of bloedagar waarvan de Gram Gram-positieve clusters van kokken heeft onthuld.
Het is ook geldig in de microbiologische analyse van onder meer voedsel, drinkwater, bodem.
QA
Zodra een partij platen met zoute mannitol-agar is bereid, is het raadzaam om een kwaliteitscontrole uit te voeren. Controlestammen worden gezaaid om te laten zien of er groei is of niet.
Bekende Staphylococcus aureus-stammen kunnen als positieve controle worden gebruikt. Het zou naar tevredenheid moeten groeien en gele kolonies ontwikkelen, en het medium krijgt ook dezelfde kleur.
Evenzo is het gemakkelijk om een bekende stam van Staphylococcus epidermidis op te nemen. Het zou naar tevredenheid moeten groeien en roze kolonies ontwikkelen, en het medium blijft dezelfde kleur of wordt donkerder tot een sterker roze.
Als negatieve controle worden soorten gebruikt die niet op dit medium zouden mogen groeien. Er kan bijvoorbeeld een bekende stam van Escherichia coli of Klebsiella pneumoniae worden gekweekt. Het verwachte resultaat is volledige remming, dat wil zeggen geen groei.
Bovendien moet een niet-geïnoculeerde plaat worden geïncubeerd. Daarin mag geen groei of kleurverandering zijn.
Het is belangrijk dat de plaat niet wordt gebruikt als er tekenen van bederf zijn, zoals vervuiling, uitdroging, verkleuring, etc.
Laatste gedachten
Bij het gebruik van zoute mannitol-agarmedium zijn er enkele belangrijke aspecten waarmee u rekening moet houden:
- Het verkrijgen van een groei van gele kolonies betekent niet dat het Staphylococcus aureus is. Er moet aan worden herinnerd dat sommige Enterococcus-stammen in dit medium kunnen groeien en mannitol kunnen fermenteren, evenals bepaalde sporenvormende Gram-positieve staafjes.
Daarom is het belangrijk om een gram op de kolonie uit te voeren en een test op catalase.
-Aan de andere kant moet in aanmerking worden genomen dat andere Staphylococcus-soorten dan aureus ook mannitol kunnen fermenteren. Daarom is het belangrijk om de kolonie te subculturen tot een voedingsbouillon om van daaruit te nemen en de coagulase-test uit te voeren.
Onder de Staphylococcus-soorten van klinisch belang voor de mens die mannitol fermenteren, zijn onder andere: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, onder anderen.
Anderen kunnen een wisselende reactie geven, dat wil zeggen soms positief en soms negatief. Sommige zijn S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, onder anderen.
-Het wordt niet aanbevolen om kolonies rechtstreeks uit mannitol-agar te nemen om de coagulase-test uit te voeren, aangezien de hoge zoutconcentratie in het medium het resultaat kan verstoren.
-Ten slotte wordt het aanbevolen om de platen die met zoute mannitol zijn gezaaid tot 48 uur te incuberen, omdat sommige stammen van S. aureus mannitol langzaam kunnen fermenteren, hoewel dit niet erg vaak voorkomt.
Referenties
- Britannia Laboratories. Zoute mannitol-agar. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
- "Zoute mannitol-agar". Wikipedia, de gratis encyclopedie. 31 okt 2018, 19:08 UTC. 17 jan 2019, 20:55, beschikbaar op: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5e ed.). Argentinië, Redactie Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Argentinië. Redactioneel Panamericana SA
- BD Laboratoria. BD Mannitol Zout Agar. 2013 Beschikbaar op: bd.com.