VOEDINGSAGAR: GRONDGEDACHTE, BEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De voedingsagar is een niet-selectief medium en geen differentiële vaste kweek. In dit medium groeien allerlei bacteriën die vanuit voedingsoogpunt niet veeleisend zijn.

Het is een eenvoudig medium en bevat ondanks de naam een ​​lagere voedingswaarde in vergelijking met andere vergelijkbare media, zoals Brain Heart Infusion Agar of Trypticase Soy Agar.

Kolonie rekenen op voedingsagar

Het nut ervan in het laboratorium is zeer gevarieerd. Het wordt voornamelijk gebruikt voor het subkweken van soorten, het in stand houden van stammen, het tellen van kolonies, als basis voor het bereiden van onder meer bloedagar.

Evenzo, vanwege de lichtbeige kleur, kan de productie van pigmenten die worden gegenereerd door sommige bacteriestammen uitzonderlijk worden onderscheiden, zoals het groenachtige pigment van Pseudomonas aeruginosa, het steenrode pigment dat door Serratia marcescens bij kamertemperatuur wordt geproduceerd, het goudgele pigment van Staphylococcus. aureus, onder anderen.

Bovendien is het een van de goedkoopste groeimedia op de markt.

Basis

Zoals hierboven al vermeld, is het een zeer eenvoudig medium dat afhankelijk is van het leveren van voedingsstoffen voor bacteriegroei zonder beperking en zonder complexe reacties om te interpreteren.

Omdat het medium doorschijnend is, is het ideaal voor het tellen van kolonies door middel van de dieptezaaimethode.

Samenstelling

Het bestaat voornamelijk uit vleesextract of gistextract, peptonen of gelatine pancreasverteermiddel, agar-agar, natriumchloride en gedestilleerd water.

Het vlees- of gistextract en de peptonen vormen de essentiële bronnen van koolstof en mineralen (stikstof, fosfor en zwavel), die door bacteriën worden gebruikt als energiebron en groeifactoren.

Evenzo is agar-agar de basis van alle vaste kweekmedia, die gelatine gaan vervangen, de eerste basisverbinding die door Robert Koch werd gebruikt om zijn media een vaste consistentie te geven.

Agar is een polysaccharide dat is samengesteld uit galactose, galactomannan, agarose en agaropectine. Het verhardt op 40 ° C en smelt bijna 100 ° C.

Natriumchloride van zijn kant voorziet het medium van de osmolariteit die nodig is voor bacteriële ontwikkeling.

Ten slotte dient het water om de gelyofiliseerde verbindingen te hydrateren en op te lossen. Er moet gedestilleerd water worden gebruikt dat is ingesteld op een neutrale pH. Kraanwater mag niet worden gebruikt omdat het calcium en magnesium bevat dat kan reageren met fosfaten in het medium en onoplosbare zouten kan vormen.

Voorbereiding

Voor één liter voedingsagar moet 31 g van het gedehydrateerde medium worden afgewogen. Doe het in een kolf en los op in een liter gedestilleerd water. Verhit na 5 minuten staan ​​boven een warmtebron en meng constant tot het 1 of 2 minuten kookt.

Bereiding van kweekmedium.

De kolf wordt vervolgens in een autoclaaf geplaatst en gedurende 20 minuten gesteriliseerd bij 121 ° C.

Sterilisatie in autoclaaf

Aan het einde van de tijd wordt het uit de autoclaaf gehaald en geserveerd in steriele petrischalen, met behulp van een laminaire stroming kap of de bunsenbrander.

Als de petrischalen wegwerp (plastic) zijn, moet het medium worden verdeeld wanneer de agar een temperatuur van ongeveer 50 ° C heeft, om te voorkomen dat deze door overmatige hitte vervormt.

Laat stollen en bewaar op een omgekeerde bordenhouder en koel bij 2-8 ° C tot gebruik.

De platen moeten worden getemperd voordat ze worden gezaaid. Voedingsagarplaten mogen niet worden gebruikt als ze vervuild of uitgedroogd zijn.

De pH van het voorbereide medium moet worden ingesteld op 7,3 ± 0,2.

Toepassingen

Het is het eenvoudigste kweekmedium dat in het microbiologielaboratorium wordt gebruikt. De formulering is uitstekend voor de groei van niet-veeleisende bacteriën.

De belangrijkste toepassingen worden hieronder uitgelegd:

Als basis voor de bereiding van bloedagar

Dit medium wordt soms gebruikt als basis om bloedagar te bereiden, maar het is niet de meest gebruikte basis.

Stimuleer de sporulatie van sporenvormende bacteriën

Dit kweekmedium is vooral nuttig voor het stimuleren van de sporulatie van sporenvormende bacteriën zoals Bacillus sp.

Hiervoor wordt een stam van het Bacillus-geslacht gezaaid en 24 uur bij 37 ° C in aerobiose geïncubeerd. Zodra de kolonies zijn gegroeid, wordt de plaat onderworpen aan temperatuurbelasting, dat wil zeggen dat de temperatuur van de oven wordt verhoogd tot 44 ° C en nog eens 24 uur wordt bewaard of gedurende 24 uur in de koelkast wordt geplaatst.

Aan het einde van de tijd worden uitstrijkjes van de cultuur gemaakt en gekleurd met Gramkleuring of met Shaeffer-Fulton-sporenkleuring. Bacillen met endosporen (sporen in de bacil) en exosporen (sporen buiten de bacil) zullen daarin worden waargenomen.

Stam onderhoud

Sommige onderzoekslaboratoria of universitaire onderwijsondersteunende laboratoria vereisen het zo lang mogelijk in stand houden van levensvatbare bacteriën van klinisch belang, om de bacteriebank (bacterioteca) te gebruiken voor onderzoekswerkzaamheden of voor de voorbereiding van onderwijspraktijken, waar de De studenten leren deze micro-organismen te manipuleren en te identificeren.

Voor dit doel kunnen zowel voedingsagar als hersen-hartinfusie-agar worden gebruikt. De agar wordt bereid, in kokers met bakelieten deksel gegoten en gekanteld op een ondergrond, zodanig dat de agar stolt en een blok vormt aan de onderkant en een schuine kant op het oppervlak (fluitbek).

Elke buis is gelabeld met de naam van de te zaaien bacteriën en de datum. Elk van de bacteriën wordt op de schuine rand gezaaid en gedurende 24 uur geïncubeerd Nadat de kolonies zijn gegroeid, worden de buisjes bij kamertemperatuur bewaard.

De bacterioteca moet worden vernieuwd van 1 tot 3 maanden om besmetting en uitdroging van het medium en de dood van de bacteriën te voorkomen.

Alleen niet-kieskeurige bacteriën kunnen op deze manier in stand worden gehouden.

Kolonie tellen

Hoewel er gespecialiseerde middelen zijn voor het tellen van kolonies, zoals standaard agar-agar, kan voedingsagar voor dit doel worden gebruikt, hetzij door oppervlakte zaaien met een drigalski-spatel of op diepte. Om deze reden is het erg nuttig bij de microbiologische analyse van voedsel en water.

Diagnostische tests uitvoeren

Omdat het een medium is dat geen bloed of andere toevoegingen bevat, is het ideaal voor het nemen van kolonies die op dit medium zijn gekweekt om de catalase-test uit te voeren.

Evenzo is het, vanwege de lichte kleur, aangewezen om oxidase-tests rechtstreeks uit te voeren op een gebied van de gezaaide agar, zonder interferentie.

Herstel van mesofiele aeroben uit recreatief zout water (stranden)

De voedingsagar bereid met 10% zeewater is nuttig voor de evaluatie van mesofiele aeroben in strandwateren.

Op deze manier kan het werkelijke niveau van verontreiniging dat de wateren hebben met deze micro-organismen worden ingezien, aangezien bij dit type monsters de resultaten overlappen wanneer op de conventionele manier bereide kweekmedia worden gebruikt.

Dit werd aangetoond door Cortez et al. in 2013 in een onderzoekswerk.

Dit kan worden verklaard door de abrupte verandering die bacteriën ondergaan wanneer ze van een hyperzoute omgeving naar een zoutarme omgeving gaan, daarom komen de micro-organismen in een toestand van lethargie terecht waarin ze levensvatbaar zijn, maar niet te kweken.

Referenties

1. "Voedende agar." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 13 september 2016, 20:33 UTC. 29 december 2018, 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Argentinië. Redactioneel Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5e ed.). Argentinië, Redactie Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effect van kweekmedia bereid met zeewater op gezondheidsindicatoren in zeewater van spa's in Chichiriviche, Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M en Cardoso M. Microbiologische kwaliteit van het water voor inseminatiedoses, voor varkens. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktische klinische microbiologie. Universiteit van Cadiz, 2e editie. UCA Publications Service.