MACCONKEY-AGAR: GRONDGEDACHTE, BEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De MacConkey-agar is een vast medium dat de exclusieve isolatie van gramnegatieve bacteriën mogelijk maakt. Om deze reden is het een selectief medium en maakt het ook onderscheid tussen lactose-fermenterende en niet-fermenterende bacillen, waardoor het een differentieel medium is. Het is een van de meest gebruikte kweekmedia in een microbiologisch laboratorium.

Dit medium wordt voornamelijk gebruikt voor de isolatie van gramnegatieve bacillen die behoren tot de Enterobacteriaceae-familie, waaronder opportunistische en enteropathogene soorten.

MacConkey-agar gezaaid met twee soorten bacteriën. Linkerzijde lactose fermenterende kolonies, rechterzijde niet-lactose fermenterende kolonies.

Het kan ook worden gebruikt om andere enterische bacillen te isoleren die in het maagdarmkanaal leven, maar niet behoren tot Enterobacteriaceae, zoals onder andere Aeromonas sp, Plesiomonas sp.

Ten slotte kan het andere niet-glucose-fermenterende gramnegatieve bacillen isoleren die in het milieu, het water of de bodem voorkomen, maar dat kunnen soms opportunistische pathogenen zijn zoals onder andere Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia.

Basis

MacConkey-agar

De basis van dit medium kan worden verklaard door de beschrijving van de componenten ervan, aangezien elk een doel heeft dat een eigenschap ervan bepaalt.

Galzouten en kristalviolet

In die zin heeft MacConkey-agar een complexe samenstelling. Allereerst bevat het galzouten en kristalviolet.

Deze elementen zijn verantwoordelijk voor het remmen van de groei van grampositieve bacteriën en sommige kieskeurige gramnegatieve bacillen. Het bevordert op zijn beurt de ontwikkeling van gramnegatieve bacillen die niet door deze stoffen worden beïnvloed. Daarom is het een selectief medium.

Er wordt gezegd dat het enigszins selectief is in vergelijking met andere media die ook de groei van Gram-positieve bacteriën en ook de meeste Gram-negatieve bacteriën remmen.

Peptonen, polypectonen en lactose

Het bevat stoffen die de nodige voedingsstoffen leveren aan de micro-organismen die zich in deze omgeving ontwikkelen, zoals peptonen, polypectonen en lactose.

Lactose is het belangrijkste punt voor het medium om een ​​differentieel medium te zijn, aangezien micro-organismen die lactose kunnen fermenteren sterke roze kolonies zullen ontwikkelen.

Sommige bacteriën kunnen lactose langzaam of zwak fermenteren, waardoor ze lichtroze kolonies ontwikkelen en lactose-positief blijven.

Degenen die lactose niet fermenteren, gebruiken peptonen als energiebron, produceren ammoniak en alkaliseren het medium. Om deze reden zijn de kolonies die ontstaan ​​zijn kleurloos of transparant.

PH-indicator

De kleurverandering wordt bereikt door een andere essentiële verbinding die MacConkey-agar heeft. Deze verbinding is de pH-indicator, die in dit geval neutraal rood is.

De fermentatie van lactose genereert de productie van gemengde zuren. Ze verzuren het medium tot een pH lager dan 6,8.

Hierdoor verandert de pH-indicator in een dieproze tint. De intensiteit van de kleur kan variëren afhankelijk van de uiteindelijke pH.

Gedestilleerd water, natriumchloride en agar

Aan de andere kant bevat het gedestilleerd water en natriumchloride die zorgen voor een medium hydratatie en osmotische balans. Ten slotte bevat het medium agar, wat de basis is die zorgt voor de consistentie van vast medium.

Het bereide MacConkey-agarmedium moet een uiteindelijke pH hebben die is ingesteld op 7,1 ± 0,2.

Voorbereiding

Voor één liter MacConkey-agar moet 50 g van het gedehydrateerde medium worden afgewogen, vervolgens in een kolf worden gedaan en opgelost in één liter gedestilleerd water. Na 10 minuten staan ​​wordt het verwarmd, onder voortdurend mengen tot het 1 minuut kookt.

De kolf wordt vervolgens in de autoclaaf geplaatst en gedurende 20 minuten gesteriliseerd bij 121 ° C. Aan het einde van de tijd wordt het uit de autoclaaf gehaald en afgekoeld tot een temperatuur van 45 ° C, om later te serveren in steriele petrischalen in een laminaire stromingskap of voor de bunsenbrander.

Laat stollen en bewaar in een omgekeerde bordenhouder en koel in een koelkast bij 2-8 ° C tot gebruik.

Om een ​​MacConkey-agar te verkrijgen die het zwervende effect van het geslacht Proteus remt, wordt een zoutarme MacConkey-agar gebruikt.

Maakt gebruik van conventionele MacConkey-agar

MacConkey Agar is inbegrepen in alle kweekmediumsets die geschikt zijn voor het zaaien van klinische monsters die in het laboratorium worden ontvangen. Het is ook nuttig in voedselmicrobiologie en omgevingsmicrobiologie.

De verscheidenheid aan gramnegatieve staafjes die in dit medium groeien, vertonen fenotypische kenmerken die helpen om een ​​vermoedelijke diagnose van de soort in kwestie te stellen. De grootte, kleur, consistentie en geur van de kolonies zijn bijvoorbeeld enkele van de kenmerken die kunnen leiden.

In dit medium produceren Escherichia coli, Klebsiella sp en Enterobacter sp-soorten sterke roze kolonies, omgeven door een zone met geprecipiteerde gal.

Terwijl bacteriën zoals Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp en Hafnia sp na 24 uur kleurloos of lichtroze in 24-48 uur kunnen lijken.

Evenzo produceren de geslachten Proteus, Edwadsiella, Salmonella en Shigella kleurloze of transparante kolonies.

Andere varianten van MacConkey-agar

Er zijn andere varianten van MacConkey Agar die specifieke doeleinden hebben. Ze worden hieronder genoemd:

MacConkey-agar met sorbitol

Dit medium is ontworpen om de enteropathogene stam (enterohemorrhagische Escherichia coli O157: H7) te onderscheiden van de rest van de Escherichia coli-stammen.

Dit medium vervangt de koolhydraatlactose voor sorbitol. De enterohemorrhagische E. coli-stammen O157: H7 verschillen van de rest omdat ze sorbitol niet fermenteren en daarom worden transparante kolonies verkregen, terwijl de rest van de E. coli-stammen sorbitol fermenteren en de kolonies sterk roze zijn.

MacConkey-agar zonder kristalviolet, noch zout

Deze agar verschilt enorm van de klassieke MacConkey-agar, omdat hij geen violet kristal heeft en Gram-positieve bacteriën kunnen groeien.

Aan de andere kant remt de afwezigheid van zout het verschijnen van zwermen op de agar die wordt geproduceerd door sommige enterische bacillen, zoals die van het Proteus-geslacht, en vergemakkelijkt zo de isolatie van alle aanwezige bacteriën, inclusief Gram-positieve bacteriën.

MacConkey-agar met cefoperazon

Deze variant van MacConkey-agar was ontworpen om in eerste instantie Laribacter hongkongensis te isoleren en bleek later bruikbaar te zijn voor de isolatie van Arcobacter butzleri. Beide zijn licht gebogen gramnegatieve staven die resistent zijn tegen cefoperazon.

Deze bacteriën zijn onlangs in verband gebracht met het veroorzaken van gastro-enteritis en verworven diarree bij Aziatische en Europese individuen, die naar voren komen als twee krachtige opkomende pathogenen.

Het antibioticum maakt het mogelijk om de bijbehorende flora van het maagdarmkanaal te remmen, wat de ontwikkeling van deze bacteriën bevordert, waardoor ze niet onopgemerkt blijven, omdat ze 72 uur nodig hebben om te groeien.

MacConkey-agar bereid met zeewater met 10% v / v

Deze variant is nuttig voor de evaluatie van bacteriële hygiënische indicatoren van fecale besmetting, inclusief totale colibacteriën en fecale colibacteriën in zoute recreatiewateren (stranden en baaien).

Cortez et al. Toonden in 2013 aan dat het op deze manier bereide medium het herstel van deze micro-organismen in het zoute milieu aanzienlijk verhoogt, vergeleken met het gebruik van MacConkey-agar bereid met gedestilleerd water.

Dit is te wijten aan het feit dat het gemodificeerde medium de groei stimuleert van bacteriën die fysiologisch in een staat van latentie "levensvatbaar maar niet-kweekbaar" zijn, en daarom kunnen ze niet worden hersteld in conventionele media.

Referenties

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Gebruik van cefoperazon MacConkey-agar voor selectieve isolatie van Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. MacConkey-agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 4 april 2018, 18:16 UTC. 29 december 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Argentinië. Redactioneel Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5e ed.). Argentinië, Redactie Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effect van kweekmedia bereid met zeewater op gezondheidsindicatoren in zeewater van spa's in Chichiriviche, Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktische klinische microbiologie. Universiteit van Cadiz, 2e editie. UCA Publications Service.