AGAR MEVR: FOUNDATION, VOORBEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De agar MRS is een selectieve vaste mediumcultuur die wordt gebruikt voor de isolatie en telling van melkzuurbacteriën, vooral van het geslacht Lactobacillus. Deze agar is in 1960 gemaakt door Man, Rogosa en Sharpe en draagt ​​dezelfde naam, maar vanwege de complexiteit wordt de afkorting MRS vaak gebruikt.

Het is samengesteld uit proteose pepton, vleesextract, gistextract, glucose, sorbitanmonoleaat, dikaliumfosfaat, natriumacetaat, ammoniumcitraat, magnesiumsulfaat, mangaansulfaat en agar.

Man Rogosa en Sharpe Agar (MRS) gezaaid met Lactobacillus sp. Bron: foto geschonken voor dit artikel door de auteurs: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto genomen tijdens het onderzoek getiteld: Evaluation of melkzuurbacteriën en Bifidobacteriën met probiotisch potentieel in moedermelk en ontlasting bij zuigelingen .

Deze samenstelling maakt de juiste ontwikkeling van melkzuurbacteriën mogelijk uit klinische monsters, zoals uitwerpselen, vaginale afscheiding, orale monsters en moedermelk, evenals zuivel- en vleesvoedsel.

Het wordt niet routinematig gebruikt in klinische laboratoria, omdat melkzuurbacteriën zelden bij ziekteprocessen betrokken zijn. Op het gebied van voedselmicrobiologie komt het gebruik van MRS-agar echter vaker voor.

Aan de andere kant wordt dit medium gebruikt door sommige onderzoekscentra die zich richten op de studie van melkzuurbacteriën.

Basis

Man, Rogosa en Sharpe-agar hebben een vrij complexe samenstelling. Door de functie van elk van zijn componenten op te splitsen, kan de basis worden verklaard.

Proteose pepton, vleesextract, gistextract en glucose zijn voedingsstoffen die de bron vormen van koolstof, stikstof, vitamines en mineralen die nodig zijn voor bacteriegroei. Bovendien is glucose de universele energiebron die in de meeste kweekmedia wordt gebruikt.

Aan de andere kant, om de groei van melkzuurbacteriën te bevorderen, is de aanwezigheid van cofactoren (kationen) die essentieel zijn voor het metabolisme van Lactobacillus en verwante bacteriën noodzakelijk; Deze verbindingen zijn de natrium-, magnesium- en mangaanzouten.

Evenzo zijn sorbitanmonoleaat of polysorbaat 80 een belangrijke bron van vetzuren omdat ze als voedingsstoffen worden opgenomen.

Bovendien werken sorbitanmonoleaat en ammoniumcitraat door de ontwikkeling van de begeleidende flora, vooral gramnegatieve bacteriën, te remmen, waardoor het selectieve karakter van deze agar ontstaat.

Ten slotte is de agar-agar degene die de vaste consistentie aan het medium geeft.

Er zijn andere varianten van Man Rogosa Sharpe-agar; een van hen is aangevuld met cysteïne (MRSc), zeer nuttig voor de isolatie van onder meer bifidobacteriën. Aan de andere kant is er het MRS-medium aangevuld met neomycine, paromomycine, nalidixinezuur en lithiumchloride, speciaal voor het selectief tellen van bifidobacteriën in zuivelproducten.

Voorbereiding

Weeg 68,25 gram van het gedehydrateerde medium af en los het op in een liter gedestilleerd water. Laat 5 minuten staan. Om volledig op te lossen, schakelt u onder regelmatig roeren naar een warmtebron en laat u 1 tot 2 minuten koken. Steriliseer gedurende 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ° C.

Bij het verlaten van de autoclaaf enkele minuten laten staan ​​en warm verdeel in steriele petrischalen.

Laat de platen stollen en keer ze om, bestel ze in bordenrekken en zet ze in de koelkast tot gebruik. Laat de platen voor gebruik opwarmen tot kamertemperatuur.

De pH van het medium moet 6,4 ± 0,2 zijn. Sommige commerciële huizen bevelen een pH aan tussen 5,5 en 5,9.

Het gedehydrateerde medium is beige van kleur en bereid is donker amber.

Zowel het gedehydrateerde medium als de voorbereide platen moeten worden bewaard bij 2-8 ° C.

Toepassingen

MRS-agarplaten kunnen aan het oppervlak worden gezaaid (uitputting of Drigalski-spatel). Het kan ook op diepte worden gezaaid. Platen moeten gedurende 24 tot 72 uur bij 37 ° C in microaërofiliciteit (4% O ₂ en 5-10% CO ₂ ) worden geïncubeerd .

De zaaimethode wordt gekozen in functie van het beoogde doel (isoleren of tellen).

Kenmerken van de koloniën

De vermoedelijke kolonies van Lactobacillus worden witachtig van kleur en hebben een slijmerig of romig uiterlijk op deze agar. Ze moeten vervolgens worden geïdentificeerd.

Isolatie van melkzuurbacteriën

Hiervoor wordt oppervlaktezaaien gebruikt. De te zaaien monsters vereisen een eerdere procedure.

In het geval van moedermelkmonsters wordt aanbevolen om 1 ml van het monster gedurende 10 minuten bij 14.000 tpm te centrifugeren om de vetlaag te verwijderen. 900 µl wordt weggegooid en in de resterende 100 µl wordt het sediment gesuspendeerd en op het oppervlak van de MRS-agar gegoten, waarna het gelijkmatig met een Drigalski-spatel moet worden verdeeld.

In het geval van ontlastingsmonsters wordt één (1) gram ontlasting gewogen en gehomogeniseerd in 9 ml 0,1% steriel peptonwater, wat overeenkomt met een verdunning van 1/10. Vervolgens worden seriële verdunningen gemaakt, totdat een uiteindelijke verdunning van ^{10-4 is verkregen} .

Ten slotte wordt 100 µl van de ^10-2 , ^10-3 en ^10-4 verdunningen genomen en elke verdunning wordt gezaaid op MRS-agar, gelijkmatig verdeeld met een Drigalski-spatel.

Melkzuurbacteriën tellen

In dit geval wordt op diepte gezaaid.

Voor moedermelkmonsters wordt 1 ml afgenomen en in een steriele conische plastic buis geplaatst. MRS-agar wordt toegevoegd bij een temperatuur van ongeveer 40 ° C tot een eindvolume van 25 ml, waardoor een homogeen mengsel wordt verkregen. Vervolgens wordt het op uniforme wijze in steriele petrischalen gegoten en tot polymerisatie met rust gelaten.

Voor ontlastingsmonsters worden verdunningen gemaakt, zoals eerder beschreven. Neem 1 ml van elke verdunning en plaats deze in steriele conische plastic buizen. Gesmolten MRS-agar wordt toegevoegd tot een volume van 25 ml.

Het mengsel van elke verdunning wordt gelijkmatig in steriele petrischalen gegoten. Ten slotte laat men rusten tot de polymerisatie.

Kolonie rekenen op Man Rogosa en Sharpe (MRS) agar. Bron: foto gedoneerd voor dit artikel. Auteurs: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto genomen tijdens het onderzoek getiteld: Evaluation of melkzuurbacteriën en Bifidobacteriën met probiotisch potentieel in moedermelk en zuigelingenuitwerpselen.

Onderzoeksniveau

Elke dag wint de studie van melkzuurbacteriën meer belangstelling; Onderzoekers zijn vooral op zoek naar nieuwe soorten en hun potentieel als startersfermenten voor standaardisatie bij de vervaardiging van onder meer zuivelproducten.

In die zin zeggen Alvarado et al. (2007) gebruikten MRS-agar om een ​​onderzoek uit te voeren waarin ze melkzuurbacteriën isoleerden, identificeerden en karakteriseerden die aanwezig waren in een ambachtelijke gerookte Venezolaanse kaas uit de Andes.

In de kaas vonden ze de aanwezigheid van bacteriën van de geslachten Lactococcus en Lactobacillus en concludeerden dat de mengsels van geïsoleerde stammen geschikt zijn als starterstammen bij de bereiding van kazen uit gepasteuriseerde melk.

Aan de andere kant, Sánchez et al. (2017) gebruikten MRS-agar om de aanwezigheid van melkzuurbacteriën in het spijsverteringskanaal van biggen te onderzoeken, om ze te gebruiken als natuurlijke probiotica die de productiviteit van gezonde biggen verhogen.

Met dit medium wisten ze vier soorten te isoleren: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae en Pediococcus pentosaceus.

Evenzo, Báez et al. (2019) gebruikten MRS-agar om melkzuurbacteriën (LAB) en bifidobacteriën met probiotisch potentieel in moedermelk en zuigelingenuitwerpselen te evalueren.

Ze slaagden erin om 11 BAL en 3 Bifidobacteria sp te isoleren in moedermelk, en 8 BAL en 2 Bifidobacteria sp. in uitwerpselen. Ze voldeden allemaal aan bepaalde parameters die bewijzen dat ze bacteriën zijn met probiotische activiteit.

De auteurs concludeerden dat zowel moedermelk als ontlasting van uitsluitend zuigelingen die borstvoeding krijgen, dienen als natuurlijke bronnen van probiotische bacteriën.

QA

Om de kwaliteit van MRS-agar te evalueren, controleert u stammen zoals:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli en Bacillus cerei.

De verwachte resultaten zijn een bevredigende groei van de eerste 6 bacteriën, terwijl E. coli en Bacillus cereus volledig moeten worden geremd.

Referenties

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Isolatie, identificatie en karakterisering van melkzuurbacteriën van een Venezolaanse gerookte ambachtelijke kaas uit de Andes. Het gebruik ervan als startercultuur. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Beschikbaar op: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolatie van melkzuurbacteriën uit het spijsverteringskanaal van de big. Rev. researcha. dierenarts. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Beschikbaar op: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M.Evaluatie van melkzuurbacteriën en Bifidobacteriën met probiotisch potentieel in moedermelk en uitwerpselen van zuigelingen in de gemeente Acevedo, Miranda 2017. Niet-gegradueerd werk om in aanmerking te komen voor Bioanalyse. Universiteit van Carabobo, Venezuela.
4. Britannia-laboratorium. MRS-agar. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
5. Wikipedia-bijdragers. MRS-agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 10 januari 2018, 19:44 UTC. Beschikbaar op: wikipedia.org Geraadpleegd op 17 februari 2019.
6. Roy D. Media voor de isolatie en opsomming van bifidobacteriën in zuivelproducten. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.