De agar Hektoen of Hektoen enterische agar vast medium is een selectieve en differentiële cultuur. Het is gemaakt in het Hektoen Instituut door King en Metzger voor de isolatie van enteropathogene bacteriën van de geslachten Shigella en Salmonella.
Het medium is samengesteld uit proteose pepton, gistextract, galzouten, lactose, sucrose, salicine, natriumthiosulfaat, natriumchloride, ijzercitraat, ammoniumcitraat, broomthymolblauw, zure fuchsine en agar. Deze formulering maakt het mogelijk om de geslachten Shigella en Salmonella te onderscheiden van de rest van de bacteriën die in dit medium kunnen groeien.
A. Virgin Hektoen-agar B. Gezaaide Hektoen-agar. Bron: Flickr.com/ De oorspronkelijke uploader was Philippinjl op de Franse Wikipedia.
Hoewel er andere media zijn met dezelfde functie als Hektoen-agar, heeft het een groter voordeel ten opzichte van andere media, vooral als je Shigella-soorten wilt herstellen.
De soort van beide geslachten veroorzaakt ernstige gastro-intestinale problemen bij mensen als gevolg van de consumptie van besmet voedsel; daarom is de overdracht fecaal - oraal. Daarom is het gebruik van Hektoen-agar vooral geïndiceerd bij de microbiologische analyse van ontlasting en voedselmonsters.
Basis
Hektoen Agar bevat peptonen en gistextract als een bron van voedingsstoffen, die de essentiële elementen leveren voor microbiële ontwikkeling.
Het bevat echter ook galzouten die werken door de groei van sommige bacteriën te remmen, vooral grampositieve en sommige gramnegatieve bacteriën. Om deze reden wordt het als een selectief medium beschouwd.
Aan de andere kant is Hektoen-agar een differentieel medium. Deze eigenschap wordt verleend door de aanwezigheid van fermenteerbare koolhydraten zoals lactose, sucrose en salicine, samen met het pH-indicatorsysteem, vertegenwoordigd door broomthymolblauw en zure fuchsine.
Alle bacteriën die op dit medium kunnen groeien en die niet tot het geslacht Salmonella en Shigella behoren, zullen zalm- of sinaasappelkolonies ontwikkelen, met uitzondering van het geslacht Proteus. Dit komt door de fermentatie van een of meer van de aanwezige koolhydraten, waardoor het medium verzuurt, waardoor de pH-indicator gaat draaien.
Van hun kant zijn het geslacht Shigella en Salmonella niet in staat om de aanwezige koolhydraten te fermenteren, waarbij ze alleen peptonen gebruiken als energiebron, die het medium alkaliseert en daarom zijn hun kolonies blauwgroen.
In dit medium kunnen ook bacteriën worden onderscheiden die waterstofsulfide (kleurloos gas) kunnen vormen. Natriumthiosulfaat fungeert als de bron van zwavel, terwijl ijzercitraat de ontwikkelaar is. Beide verbindingen maken de vorming mogelijk van een zwart neerslag van ijzersulfide dat de reactie laat zien.
Het zwarte neerslag in het midden van de kolonie met een transparante halo eromheen geeft een visoog-uiterlijk. Dit kenmerk suggereert de aanwezigheid van het geslacht Salmonella.
Ten slotte handhaaft het natriumchloride de osmotische balans en geeft de agar de vaste consistentie aan het medium.
Voorbereiding
Weeg 76 g van het gedehydrateerde medium af en los op in een liter gedestilleerd water. Schud het mengsel krachtig en laat het 10 tot 15 minuten rusten. Het kan worden verwarmd en gekookt, waarbij draaiende bewegingen worden gemaakt totdat het volledig is opgelost. Dit medium is niet geautoclaveerd.
Wanneer het medium een temperatuur van ongeveer 45 ° C bereikt, wordt een volume van 20 ml direct in steriele petrischalen gegoten.
De agar mag stollen. Op dat moment zijn ze klaar voor gebruik. Het wordt aanbevolen om ze onmiddellijk te gebruiken. Als dit niet mogelijk is, worden ze tot gebruik in de koelkast bewaard.
Borden moeten voor het zaaien uit de koelkast worden gehaald om ze op kamertemperatuur te brengen.
De pH van het medium moet 7,5 ± 0,2 zijn. De kleur van het gedehydrateerde medium is paars en het bereide medium is bruinachtig groen.
Gebruik
Het gebruik van Hektoen-agar wordt aanbevolen voor het zoeken naar bacteriën van het geslacht Shigella en Salmonella in ontlasting en voedselmonsters.
De mogelijkheid om deze bacteriën te isoleren wordt aanzienlijk vergroot als het monster eerder is verrijkt met speciale bouillon, zoals selenietbouillon, cystineselenietbouillon, tetrathionaatbouillon, enz.
Het inoculum moet sterk zijn en het zaaien gebeurt door middel van strepen. De platen worden 24 tot 48 uur geïncubeerd bij 37 ° C in aerobiose.
Incubatie gedurende 48 uur wordt aanbevolen omdat de kenmerken van de kolonies op dit moment duidelijker zijn voor hun interpretatie en differentiatie.
QA
Om kwaliteitscontrole op dit medium uit te voeren, worden gecertificeerde bacteriestammen gebruikt, zoals: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 en Shigella sonnei ATCC 25931.
De verwachte resultaten zijn als volgt: Salmonella typhimurium en Salmonella enteritidis zouden blauwgroene kolonies met of zonder zwart centrum moeten ontwikkelen. Terwijl de Shigella-soort zal groeien als blauwgroene kolonies.
Stammen van Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 en Staphylococcus aureus ATCC 25923 kunnen ook worden opgenomen.
In deze gevallen zijn de waargenomen kenmerken de volgende: E. coli en K. pneumoniae zullen in dit medium zalmoranje kolonies ontwikkelen met een neerslag van dezelfde kleur eromheen. Terwijl Proteus blauwgroene kolonies zal ontwikkelen met of zonder een zwart centrum.
Terwijl S. aureus en E. faecalis moeten worden geremd, slaagt E. faecalis er af en toe in om te groeien als zeer kleine, gele kolonies.
Aan de andere kant, aangezien dit medium niet geautoclaveerd is, is het belangrijk om de steriliteit van het medium te evalueren. Daarom moeten van elke bereide batch één tot twee niet-geïnoculeerde platen gedurende 24 uur bij 37 ° C in aerobiose worden geïncubeerd.
Uiteraard wordt op de plaat geen enkele groei verwacht.
Beperkingen
-De Proteus-soorten kunnen zich in dit medium ontwikkelen en de kenmerken van hun kolonies kunnen worden verward met Salmonella- of Shigella-soorten. Om deze reden moet elke verdachte kolonie worden bevestigd met biochemische tests.
-Het is noodzakelijk om het gebruik van dit medium te combineren met andere, minder selectieve agars, omdat als het gezochte micro-organisme in lage concentraties wordt aangetroffen, het zich mogelijk niet in dit medium ontwikkelt.
-Oververhit niet tijdens de bereiding, omdat overmatige hitte de samenstelling van het medium verandert.
-Ongewoon kunnen kolonies van lactose fermenterende Salmonella verschijnen die onopgemerkt kunnen blijven.
Referenties
- Wikipedia-bijdragers. Hektoen enterische agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 13 maart 2019, 23:38 UTC. Beschikbaar op: .wikipedia.org / geraadpleegd op 16 maart 2019.
- BD Laboratoria. BD Hektoen Enterische Agar (HE Agar). 2013 Beschikbaar op: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoen Enterische Agar. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratoria. Hektoen agar. Beschikbaar op: f-soria.es
- Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2e editie. Beschikbaar op: bd.com/europe