MAÏSMEEL-AGAR: ACHTERGROND, BEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De maïsmeel-agar is een vast kweekmedium, heeft een laag voedingsvermogen, is nuttig voor het subkweken van bepaalde schimmels en voor het aantonen van de chlamydosporen in stammen van het Candida albicans-complex. In het Engels staat het bekend als Corn Meal Agar.

Het conventionele maïsmeelmedium heeft een zeer eenvoudige samenstelling, het bevat maïsmeel, agar-agar en water. Vanwege het lage voedingsniveau is het ideaal voor gebruik bij het onderhoud van schimmelstammen gedurende matige perioden, met name zwarte schimmels.

A. Grafische weergave van het Candida albicans-complex op maïsmeelagar. B. Chlamydosporen van het Candida albicans-complex onder de microscoop, gevormd op maïsmeelagar. Bron: A. GrahamColm / B. Door: CDC / Dr. William Kaplan, met dank aan: Public Health Image Library.

De sporulatie van het Candida albicans-complex heeft de voorkeur in dit medium, als 1% Tween 80 wordt toegevoegd tijdens de bereiding van de agar. De vorming van chlamydosporen is kenmerkend voor deze soort en praktisch de enige die mensen treft.

Er zijn andere soorten die chlamydosporen vormen, maar het is onwaarschijnlijk dat ze mensen treffen, zoals Candida australis, aanwezig in pinguïnuitwerpselen, of C. clausenii, een zelden gevonden saprofiet. Evenzo konden uitzonderlijk de soorten C. stellatoidea en C. tropicalis ze vormen.

Aan de andere kant bevordert de toevoeging van glucose aan het maïsmeelmedium de vorming van pigmenten in Trichophytom rubrum-stammen.

Het is belangrijk om te benadrukken dat er schimmels zijn die geen hyfen of pseudohyfen vormen in maïsmeelagar, zoals Cryptococcus neoformans, die verschillen van andere geslachten.

Maïsmeel-agar kan thuis in het laboratorium worden gemaakt of commerciële media kunnen ook worden gebruikt.

Basis

Maïsmeel is het substraat, agar is het stollingsmiddel en water is het oplosmiddel.

Maïsmeel-agar kan worden aangevuld met tween 80 (sorbitanmonooleaat of polysorbaatpolyester 80). Deze verbinding vermindert de oppervlaktespanning van het medium vanwege zijn emulgerende kracht.

Het creëert ook een vijandige omgeving die overdreven celvermenigvuldiging remt en de groei van hyfen stimuleert, waardoor ook de productie van chlamydosporen wordt bevorderd; de laatste beschouwde verzetsstructuren. Deze structuur helpt bij de identificatie van de Candida albicans-soort.

Glucose in dit medium verhoogt op zijn beurt het pigmentvormende vermogen van sommige schimmels.

Opgemerkt moet worden dat het maïsmeelmedium met glucose niet bruikbaar is voor het aantonen van chlamydosporen in het Candida albicans-complex.

Voorbereiding

Zelfgemaakte Maïsmeel Agar Voorbereiding

Weeg 47 g gele maïsmeel af en los op in 500 ml gedestilleerd water. Verhit tot 60 ºC, al roerend, gedurende ongeveer 1 uur. Filtreer vervolgens door een stuk gaas en katoen, eventueel kan het weer worden gefilterd door het preparaat door een Whatman nr. 2 filtreerpapier te voeren.

Vul met gedestilleerd water aan tot 1000 ml. Voeg 17 g agar-agar toe, verwarm tot het is opgelost. Autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ºC.

Serveer in steriele petrischalen. Bewaar in de koelkast.

De kleur van het bereide medium is witachtig met een klonterig uiterlijk.

Als je aan het hierboven beschreven preparaat maïsmeel met glucose wilt bereiden, voeg dan 10 g glucose toe.

Commerciële maïsmeel-agar

Weeg 17 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Het mengsel kan worden verwarmd, zachtjes schudden om volledig op te lossen. Steriliseer gedurende 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ºC, bij 15 lb.

Giet in steriele petrischalen. Laat stollen. Omkeren en tot gebruik in de koelkast bewaren. Tempereer voor gebruik.

De pH moet 6,0 ± 0,2 zijn bij 25 ºC.

Maïsmeel-agar met Tween 80

Om te voldoen aan ISO 18416, moet maïsmeelagar als volgt worden bereid:

Weeg 65 gram per liter af en voeg 10 ml Tween 80 toe. Verhit en kook gedurende enkele minuten tot het is opgelost, zorg ervoor dat je niet te veel oververhit. Steriliseer 15 minuten op 121 ºC.

Maïsmeel-agar met glucose

Om de chromogene kracht van Trichophyton rubrum-kolonies te verbeteren en ze te onderscheiden van T. mentagrophytes, kan 0,2% glucose aan de oorspronkelijke formule worden toegevoegd. U hoeft geen Tween 80 te hebben, aangezien glucose de vorming van chlamydosporen remt.

Gebruik

Het gebruik van maïsmeelagar is voornamelijk bedoeld voor de studie van Candida-stammen, en helpt hun identificatie door de karakteristieke observatie van chlamydosporen in de albicans-soort. Dat wil zeggen, het gebruik van deze agar dient als een aanvullende methode voor het identificeren van deze gisten.

Zowel saprofytische als pathogene soorten kunnen zich op deze agar ontwikkelen, maar elk vormt karakteristieke myceliumstructuren. Soorten van het geslacht Torulopsis produceren bijvoorbeeld geen mycelium en planten zich alleen voort door blastoconidia.

Evenzo produceren Trichosporon- en Geotrichum-soorten arthroconidia op maïsmeelagar en is het soms moeilijk om onderscheid te maken tussen de een en de ander.

Arthroconidia van het geslacht Geotrichum produceren een verlenging van de hyfen die lijkt op een hockeystick.

Ook de productie van pigmenten met maïsmeelagar aangevuld met glucose is nuttig bij de identificatie van Trichophytom rubrum.

Gezaaid

Verdachte Candida-kolonies die zijn verkregen in het primaire kweekmedium - Sabouraud-agar - uit klinische monsters, cosmetica, aarde, onder andere, worden gesubcultiveerd op maïsmeelagar. Het medium wordt gezaaid en 24 tot 48 uur bij 22 ° C geïncubeerd. De incubatietijd kan indien nodig worden verlengd.

Chlamydospore-demonstratie

Hiervoor moet de maïsmeelagar met Tween 80 worden geïnoculeerd met de Dalmau-techniek. Deze methode bestaat uit het nemen van een deel van de verdachte kolonie met het platina handvat en drie parallelle sneden in het midden, waarbij het handvat op 45 ° wordt gehouden. De sneden moeten op een afstand van 1 cm van elkaar worden gescheiden.

Vervolgens wordt een eerder gevlamd afdekobject op de ingezaaide strepen gelegd, zodat de helft bedekt is en de andere onbedekt.

Incubeer de geplaatste platen bij 30 ° C gedurende 48-72 uur en onderzoek vervolgens onder de microscoop door de dekglaasje.

Onderhoud van schimmelstammen

Voor het behoud van stammen worden de gezaaide en gekweekte platen in de koelkast bewaard (4 tot 8 ºC). Op deze manier kunnen ze enkele weken meegaan en worden gebruikt voor onderwijs- of onderzoeksdoeleinden.

QA

Voor de steriliteitscontrole wordt een plaat zonder inoculatie bij kamertemperatuur geïncubeerd, er wordt verwacht dat er geen groei of kleurverandering zal zijn.

Voor kwaliteitscontrole kunnen bekende stammen worden gezaaid zoals: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

De verwachte resultaten zijn gedeeltelijke remming van S. aureus en E. coli. Terwijl een bevredigende groei wordt verwacht in de rest van de soorten.

Aspergillus niger groeit met zwarte en sporenvormende kolonies in een tijd van ongeveer 5 dagen incubatie.

Candida albicans gistkolonies met productie van chlamydosporen.

Saccharomyces cerevisiae produceren grote gistcellen.

Beperkingen

Op de bodem van de plaat vormt zich een geel neerslag dat niet met kolonies mag worden verward.

Referenties

1. Neogen Laboratories. Maïsmeel Agar. Beschikbaar op: foodsafety.neogen.com.
2. Culture Media Microkit. Maïsmeel Agar. Beschikbaar op: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Identificatiegids voor gist. Beschikbaar op: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Public Health, 2002; 19 (4): 206-208. Beschikbaar op: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Algemene mycologie. 1994. 2e editie Centrale Universiteit van Venezuela, bibliotheekuitgaven. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Vergelijkende studie van enkele macro- en microscopische methoden voor de isolatie en herkenning van het geslacht Candida. Colombiaanse Rev. of Pharmaceutical Chemical Sciences. 1970; 3 (1): 33-57. Beschikbaar op: Ciencias.unal.edu.co