CLED AGAR: GRONDGEDACHTE, GEBRUIK EN BEREIDING - BIOLOGIE - 2025

De CLED-agar (Lactose-Electrolyte-Cystine-Deficient) is een vast kweekmedium differentieel, gebruikt voor de diagnose van urineweginfecties. De samenstelling van het kweekmedium is ontworpen voor een goede groei van urinaire pathogenen en is ideaal voor de kwantificering van kolonievormende eenheden (CFU).

Het CLED-kweekmedium is niet-selectief, aangezien er gramnegatieve en grampositieve micro-organismen in kunnen groeien. Maar dit is geen probleem, aangezien de meeste UTI's worden veroorzaakt door slechts één type micro-organisme.

CLED-agar

In het geval van polymicrobiële infecties kunnen 2 of 3 verschillende bacteriën worden verkregen, maar het is zeer zeldzaam en meestal zijn het besmette monsters.

Onder de gramnegatieve bacteriën die in dit medium kunnen groeien, zijn de bacillen die behoren tot de Enterobacteriaceae-familie en andere darmbacillen, de uropathogenen die het vaakst in urinemonsters worden geïsoleerd, zijn de volgende: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, onder anderen.

Evenzo behoren tot de Gram-positieve bacteriën die in dit medium kunnen groeien Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp en zelfs gisten, zoals het Candida albicans-complex, kunnen groeien.

Vanwege de chemische samenstelling van het medium staat het echter de groei van sommige veeleisende urogenitale pathogenen, zoals Neisseria gonorrhoeae en Gardnerella vaginalis, niet toe.

CLED Agar Rationale

Het CLED-kweekmedium heeft vleesextract, pancreashydrolysaat van caseïne en hydrolysaat van gelatine als energiebron. Ze leveren de voedingsstoffen voor de ontwikkeling van niet veeleisende bacteriën.

Het bevat ook cystine, een aminozuur dat de groei van coliformen mogelijk maakt, te onderscheiden door hun kleine omvang.

Evenzo bevat het lactose als fermenteerbaar koolhydraat, daarom is dit medium differentieel; de fermenterende bacteriën kunnen onderscheiden van de niet-lactose fermenterende.

Fermenterende bacteriën zorgen ervoor dat de pH van het medium verandert door de productie van zuren, waardoor gele kolonies ontstaan, terwijl niet-fermenterende bacteriën geen veranderingen in het medium veroorzaken en daarom de kleur aannemen van de oorspronkelijke agar, groen.

De fermentatiereactie wordt onthuld dankzij de aanwezigheid van de pH-indicator, die in dit medium broomthymolblauw is.

Aan de andere kant remt de lage elektrolytconcentratie van het medium de typische invasieve groei van het geslacht Proteus, het zogenaamde zwermeffect. Dit genereert een voordeel ten opzichte van andere media, omdat het het mogelijk maakt om CFU's te tellen, ook als het geslacht Proteus aanwezig is.

De lage concentratie elektrolyten remt echter de groei van sommige soorten van het geslacht Shigella, wat een nadeel is in vergelijking met andere media.

Rationale voor CLED-agar (Bevis)

Er is een variant of wijziging van dit medium gemaakt door Bevis, die zure fuchsine (de indicator van Andrade) in de oorspronkelijke compositie verwerkte. Het werkt in combinatie met broomthymolblauw om fermentatie te onderscheiden van niet-fermenterende bacteriën.

Het verschil tussen conventioneel en gemodificeerd medium is de kleur die de kolonies aannemen. In het geval van lactose-fermenterende bacteriën worden de kolonies roodachtig oranje met een roze of rode halo, terwijl de niet-fermenterende bacteriën blauwgrijs zijn.

Toepassingen

CLED-agar wordt uitsluitend gebruikt voor het zaaien van urinemonsters. Het gebruik van dit medium komt vooral veel voor in Europese laboratoria, terwijl het in Amerika minder wordt gebruikt.

De monsterafname moet aan bepaalde parameters voldoen om betrouwbare resultaten te verkrijgen, waaronder:

• Neem geen antibiotica voordat u een monster neemt.
• Neem de urine bij voorkeur 's morgens als eerste in, aangezien deze meer geconcentreerd is, wanneer het niet mogelijk is om het monster op invasieve wijze af te nemen.
• Was de geslachtsdelen goed voordat u het monster neemt.
• Gooi de eerste urinestraal weg en plaats de container.
• Verzamel 25 tot 30 ml urine in een goed gelabelde steriele container.
• Met ijs omgeven naar het laboratorium.
• Het moet binnen 2 uur na uitgifte worden verwerkt of maximaal 24 uur worden gekoeld bij 4 ° C.

Urinemonsters zaaien

Het urinemonster moet 1:50 worden verdund.

Voor verdunning, plaats 0,5 ml patiënturine en verdun met 24,5 ml steriele fysiologische oplossing.

Meet 0,1 ml van de verdunde urine af en verspreid het oppervlak met een drigalski-spatel op het CLED-medium. Dit is de beste zaaimethode om kolonies te tellen. Om deze reden wordt het gebruikt in urinemonsters, aangezien de resultaten moeten worden uitgedrukt in CFU / ml.

Om de verkregen kolonies te kwantificeren, gaat u als volgt te werk: tel de kolonies op het bord en vermenigvuldig dit met 10 en vervolgens met 50. Dit geeft u de hoeveelheid CFU / ml urine.

Interpretatie

Tellingen boven 100.000 CFU / ml - Geeft een urineweginfectie aan

Tellingen onder 1000 CFU / ml- - Geen infectie

Telt tussen 1000-10.000 CFU / ml - Twijfelachtig, mogelijke besmetting, herhaal bemonstering.

ID kaart

De kolonies die op CLED-agar worden gekweekt, moeten een Gram hebben en afhankelijk van de morphotintoriale kenmerken van het micro-organisme wordt een bepaalde subcultuur uitgevoerd.

Als het bijvoorbeeld een gramnegatieve bacil is, wordt het gezaaid op een MacConkey-agar, waar de fermentatie van lactose al dan niet wordt bevestigd. Bovendien wordt een voedingsagar bevestigd om de oxidase-test uit te voeren.

In het geval dat de Gram Gram-positieve kokken onthult, kan deze worden gesubkweekt op zoute mannitolagar en op voedingsagar. In het laatste geval wordt de catalase-test uitgevoerd. Als er ten slotte gisten worden waargenomen, wordt deze gezaaid op Sabouraud-agar.

Veel laboratoria vermijden het gebruik van CLED-medium en geven er de voorkeur aan om alleen bloedagar, MacConkey en voedingsagar te gebruiken om urinemonsters te zaaien.

Voorbereiding

Los in een kolf met een liter gedestilleerd water 36,2 g CLED-agarpoeder op. Verwarm na 5 minuten staan ​​de geresuspendeerde agar en meng gedurende 1 minuut constant tot koken.

Steriliseer vervolgens 15 minuten bij 121 ° C in de autoclaaf. Aan het einde van de tijd wordt het uit de autoclaaf gehaald en afgekoeld tot een temperatuur van 45 ° C. Vervolgens wordt in elke steriele petrischaal 15-20 ml geserveerd.

De procedure voor het serveren van borden moet worden uitgevoerd in een kap met laminaire stroming of voor de bunsenbrander om besmetting te voorkomen.

De opgediende borden worden gestold, in een omgekeerd rek geplaatst en tot gebruik in een koelkast (2-8 ° C) bewaard.

De uiteindelijke pH van het voorbereide medium moet 7,3 ± 0,2 zijn.

Referenties

1. Aanbevelingen voor de microbiologische diagnose van urineweginfectie. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Beschikbaar op: scielo.org.
2. Panchi J. Identificatie van het microbiële agens dat urineweginfecties veroorzaakt bij opgenomen patiënten die blaaskatheterisatie ondergaan. 2016. Undergraduate werk om in aanmerking te komen voor de bachelor's degree in Clinical Laboratory. Technische Universiteit van Ambato. Ecuador.
3. Britannia Laboratories. CLED medium. Beschikbaar op: britanialab.com.
4. Renylab Laboratoria. Gebruiksaanwijzing, CLED Agar. 2013 Beschikbaar op: es.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories. Basishandleiding microbiologie. Beschikbaar op: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. De CLED-agaroptie in urinekweekroutine. Een prospectieve en vergelijkende evaluatie. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktische klinische microbiologie. Universiteit van Cadiz, 2e editie. UCA Publications Service.