SIMMONS-CITRAATAGAR: GRONDGEDACHTE, BEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De agar Simmons-citraat is een vast medium dat wordt gebruikt als micro-organismen voor biochemische identificatie, vooral gram - negatieve bacillen. Het originele medium is in 1923 door Koser gemaakt.

Koser's citraatmedium bestond uit een bouillon die natriumfosfaat, ammoniumfosfaat, monokaliumfosfaat, magnesiumsulfaat en natriumcitraat bevatte.

A. Gedehydrateerd Simmons-citraatagar, commercieel medium B. Bereid Simmons-citraatagar. Bron: A. Foto gemaakt door MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios, van Wikimedia Commons

Zoals te zien is, is de enige bron van koolstof in het medium citraat, en van stikstof is ammoniumfosfaat, waarbij eiwitten en koolhydraten weggelaten worden als een bron van deze elementen; ze zijn gewoonlijk aanwezig in andere media.

Daarom kunnen de bacteriën die in dit medium worden geïnoculeerd, zich alleen voortplanten als ze de koolstof uit citraat kunnen opnemen. De test was positief als er troebelheid in het medium was, maar had als nadeel dat niet-specifieke troebelheid kon optreden.

Dit probleem werd door Simmons opgelost door broomthymolblauw en agar toe te voegen aan de oorspronkelijke formule van Koser. Hoewel het principe hetzelfde is, wordt het anders geïnterpreteerd.

Basis

Sommige bacteriën kunnen overleven in afwezigheid van fermentatie of melkzuurproductie, waarbij ze energie nodig hebben door het gebruik van andere substraten. In deze test is de enige aangeboden koolstofbron citraat.

Bacteriën die onder deze omstandigheden kunnen overleven, metaboliseren citraat snel in een alternatief voor de traditionele route, met behulp van de tricarbonzuurcyclus of de citraatfermentatiecyclus.

Het katabolisme van citraat door bacteriën omvat een enzymatisch mechanisme zonder tussenkomst van co-enzym A. Dit enzym is bekend onder de naam citricase (citraatoxaalacetaatlyase) of citraat-desmolase. De reactie vereist de aanwezigheid van een tweewaardig kation, dat in dat geval wordt geleverd door magnesium.

De reactie genereert oxaalacetaat en pyruvaat, die vervolgens aanleiding geven tot organische zuren in het midden van een alkalische pH die wordt gevormd door het gebruik van de stikstofbron. Deze organische zuren worden gebruikt als koolstofbron die carbonaten en bicarbonaten genereert, waardoor het milieu verder alkaliseert.

Zaaimodus

Simmons-citraatmedium moet met een rechte lus of naald licht in vissenstaart worden geïnoculeerd en gedurende 24 uur bij 35-37 ° C worden geïncubeerd. Na verloop van tijd worden de resultaten waargenomen.

Het zaaien gebeurt alleen op het oppervlak van de agar. Niet doorboren.

Interpretatie

Als het medium de oorspronkelijke kleur (groen) blijft en er geen zichtbare groei is, is de test negatief, maar als het medium blauw wordt, duidt dit op de aanwezigheid van alkalische producten, wat wordt gedetecteerd door de pH-indicator. In dit geval is de test positief.

Citraat (+) en (-). Bron: MSc. Marielsa gil

Dit gebeurt omdat als de bacterie de koolstof van het citraat gebruikt, hij ook in staat is de stikstof van het ammoniumfosfaat op te nemen waarmee hij ammoniak afgeeft, waardoor het medium alkalisch wordt.

Aan de andere kant, als groei van de bacteriën wordt waargenomen in het medium, maar er is geen kleurverandering, moet de test ook als positief worden beschouwd, want als er groei is, betekent dit dat de bacteriën citraat als koolstofbron konden gebruiken, hoewel er momenteel geen verandering in pH is (soms kan het even duren).

Als er enige twijfel bestaat over de interpretatie van de uiteindelijke kleur, kan deze worden vergeleken met een niet-geïnoculeerde citraatbuis.

Voorbereiding

Weeg 24,2 g van het gedehydrateerde medium af voor één liter water. Mix en laat ongeveer 5 minuten rusten. Voltooi het oplossen van het medium door het 1 of 2 minuten te verwarmen en regelmatig te schudden.

Giet 4 ml in reageerbuizen en autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Bij het verlaten van de autoclaaf, kantel met behulp van een steun zodanig dat de agar stolt in de vorm van een fluitsnavel met een blokje of bodem en meer afschuining.

De uiteindelijke pH van het citraatmedium is 6,9 (groene kleur). Dit medium is erg gevoelig voor veranderingen in pH.

Bij pH 6 of lager wordt het medium geel. Deze kleur wordt niet waargenomen in de bacterietest.

En bij pH 7,6 of hoger wordt het medium diep Pruisisch blauw.

Gebruik

Simmons Citraat Agar wordt gebruikt voor de identificatie van bepaalde micro-organismen, met name bacillen die behoren tot de Enterobacteriaceae-familie en andere niet-glucose fermenterende bacillen.

Bron: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana SA Argentina.

Laatste gedachten

Simmons-citraatmedium is een zeer delicate test, omdat fout-positieven kunnen worden verkregen als bepaalde fouten worden gemaakt.

De zorg die moet worden genomen, zijn de volgende:

Inoculum

Er mag geen erg dik of beladen bacterieel inoculum worden gemaakt, omdat dit een koperachtige gele kleur kan veroorzaken op de zaaiplaats, zonder de rest van het medium aan te tasten, maar het kan doen vermoeden dat er groei is. Het betekent niet dat de test positief is.

Ook kan een dik inoculum een ​​vals-positief resultaat opleveren, omdat organische verbindingen die binnen de celwanden van stervende bacteriën worden gevormd, voldoende koolstof en stikstof kunnen afgeven om de pH-indicator te veranderen.

Daarom is het ideaal om te zaaien met de naald in plaats van met de platina handgreep om overtollig materiaal te vermijden.

Gezaaid

Aan de andere kant, wanneer de batterij van biochemische tests voor de identificatie van het micro-organisme in kwestie wordt gezaaid, is het belangrijk dat de citraattest als eerste wordt geënt, om de overdracht van eiwitten of koolhydraten uit een ander medium te voorkomen.

Onder deze omstandigheid is het mogelijk om een ​​vals-positief resultaat te krijgen, omdat elk van deze stoffen die per ongeluk worden geïntroduceerd, wordt gemetaboliseerd en een verandering in de pH veroorzaakt.

Een andere manier om overdracht van stoffen te voorkomen, is door de lus goed te verbranden en een nieuw inoculum te nemen tussen de ene test en de andere.

Voorzichtigheid is geboden bij het aanraken van de kolonie om het inoculum uit te voeren, aangezien het moet worden vermeden om een ​​deel van de agar uit de kweek waaruit de bacteriën komen, te slepen vanwege het bovenstaande uitgelegd.

In die zin raden Matsen, Sherris en Branson aan om het inoculum te verdunnen in een fysiologische oplossing voordat de citraattest wordt ingeënt om de overdracht van andere koolstofbronnen te vermijden.

Kleurintensiteit

Houd er rekening mee dat de intensiteit van de geproduceerde kleur wanneer de test positief is, kan variëren naargelang het commerciële huis.

Bovendien zijn er micro-organismen die na 24 uur positief testen, maar er zijn andere stammen die 48 uur of langer nodig hebben om een ​​pH-verandering teweeg te brengen.

Referenties

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemische tests voor de identificatie van bacteriën van klinisch belang. 3e ed. Redactioneel Panamericana. Buenos Aires. Argentinië.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana SA Argentina.
4. BD Laboratoria. BBL Simmons Citraat Agar Slants. 2015 Beschikbaar op: bd.com
5. Britannia Laboratories. Simmons Citraat Agar. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
6. Diagnostische laboratoria van Valtek. Simmons Citraat Agar. 2016 Beschikbaar op: andinamedica.com.