CHOCOLADE-AGAR: BASIS, GEBRUIK EN BEREIDING - BIOLOGIE - 2026

De chocolade-agar is een vast kweekmedium, verrijkt, niet - selectief en niet - differentieel. Het wordt voornamelijk gebruikt voor het isoleren van micro-organismen die veeleisend zijn vanuit voedingsoogpunt, hoewel elk type bacterie erin kan groeien.

Om deze reden neemt het nut ervan toe, vooral bij het zaaien van monsters die normaal gesproken steriel zijn, zoals CSF en gewrichtsvloeistof. Hoewel het ook is opgenomen in de gekozen middelen voor het zaaien van polymicrobiële monsters, is in deze gevallen de toevoeging van antibiotica nodig die de gelijktijdige flora remmen.

Chocolade-agar met bacteriegroei

Dit medium heeft een karakteristieke bruine kleur die erg lijkt op chocolade, vandaar de naam. De bereiding lijkt sterk op die van bloedagar, alleen in dit geval moet het bloed worden verwarmd om de rode bloedcellen te laten afbreken.

De bereiding ervan is, net als bloedagar, erg delicaat, omdat het gemakkelijk kan worden besmet. Om deze reden geven veel laboratoria de voorkeur aan dit medium dat al is voorbereid door commerciële bedrijven die de kwaliteit ervan garanderen.

Basis

Dit medium bestaat uit een voedingsrijke agarbasis en verwarmd bloed. Hemolyse van rode bloedcellen levert factor X (hemine) en factor V (NAD) op, die nodig zijn voor de groei van sommige micro-organismen, zoals het geslacht Haemophilus. Het is ook erg handig voor het isoleren van Neisserias sp.

Net als bloedagar kunnen verschillende media worden gebruikt als basisagar, afhankelijk van de behoefte. Tot de gebruikte media behoren hersenhartinfusie en trypticase-soja-agar, hoewel de meest aanbevolen agar-agar, Müeller Hinton, GC-agar en Thayer Martin-agar worden aanbevolen.

Sommige varianten van chocolade-agar bevatten een in de handel verkrijgbaar versterkt supplement genaamd Isovitalex of Polivitex.

Deze supplementen bevatten vitamine B ₁₂ , L-glutamine, adenine, guaninehydrochloride, p-aminobenzoëzuur, nicotinamide-adeninedinucleotide (NAD), thiaminepyrofosfaat, ijzernitraat, thiaminehydrochloride, cysteïnehydrochloride, L-cystine en glucose.

Het is belangrijk op te merken dat chocolade-agar meer verrijkt is dan bloedagar, maar het is niet mogelijk om hemolysepatronen waar te nemen.

Toepassingen

Bron: pixnio.com. Auteur:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Chocolade-agar bereid met Columbia-agar

Dit medium bevat pancreasvertering van caseïne en hart, maagvertering van vlees, natriumchloride, agar, gistextract en maïszetmeel. Het is ook rijk aan vitamines, mineralen en essentiële aminozuren.

Deze verwarmde bloedbasis is ideaal voor het isoleren van bacteriën van het geslacht Neisseria. Als daarentegen een supplement voor Brucella aan het medium wordt toegevoegd, kan het genoemde micro-organisme worden geïsoleerd. Resultaten worden verbeterd met paardenbloed.

Chocolade-agar bereid met GC-basisagar (voor gonokokken)

Dit medium bevat peptonen, maïzena, monobasische en dibasische buffers, natriumchloride en agar.

De meeste commercieel bereide chocolade-agar-presentaties worden geleverd met deze basis en bevatten geen verwarmd bloed, maar eerder een synthetisch mengsel van hemine en een chemisch supplement van groeifactoren, vitamines, mineralen, aminozuren, factor V en glucose.

Chocolade-agar bereid met Müeller Hinton-agar

Het wordt gebruikt om de antimicrobiële gevoeligheid van kieskeurige micro-organismen, zoals Streptococcus pneumoniae, te testen met 5% verwarmd schapenbloed.

Het wordt ook gebruikt voor de primaire isolatie van Neisserias en Haemophilus, maar in het specifieke geval van de isolatie van Haemophilus verdient het gebruik van paardenbloed de voorkeur, aangezien het een rijke bron is van factor X en V.

Aan de andere kant, als het te zaaien monster afkomstig is uit een niet-steriel gebied, wordt de toevoeging van antibiotica aanbevolen om de normale flora van het gebied te remmen.

Voorbeeld voor respiratoire monsters waarbij de aanwezigheid van bacteriën van het geslacht Haemophilus wordt vermoed: bacitracine wordt gebruikt om de groei van Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus en saprofytische Neisseria's te remmen.

In het geval van genitale chancre-monsters, waar Haemophilus ducreyi wordt vermoed, is met succes een chocolade-agar gebruikt die als volgt is bereid: Müeller - Hinton-agar met 5% gechocolateerd paardenbloed, 1% Isovitalex-verrijking en 3 µg / ml vancomycine.

Chocolade-agar bereid met Thayer Martin-agar

Dit medium is speciaal voor de isolatie van Neisseria gonorrhoeae. Het moet antibiotica bevatten om de bijbehorende flora te remmen. Lamsbloed wordt gebruikt.

Voorbereiding

U zou de indicaties moeten zien voor de bereiding van de te gebruiken basisagar. Ze bevinden zich op de achterkant van de container met het gedehydrateerde medium. Ze beschrijven over het algemeen hoeveel u moet wegen om een ​​liter kweekmedium te bereiden.

De exacte benodigde hoeveelheid kan in het laboratorium worden bereid, het kan meer of minder zijn dan een liter.

Berekeningen

Een regel van drie wordt gebruikt om te berekenen hoeveel we moeten wegen om het gewenste volume te bereiden. Voorbeeld:

Als het voor 1 liter nodig is om 40 gram te wegen en het laboratorium 800 ml nodig heeft, wordt er gezegd:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

De formule is als volgt:

X = 32 gr (af te wegen hoeveelheid voor 800 ml).

Weeg en los op

De benodigde hoeveelheid wordt afgewogen en met het water in een kolf gedaan.

Verwarm op middelhoog vuur en meng voorzichtig met draaiende bewegingen tot het gedehydrateerde medium volledig is opgelost, laat het 1 minuut koken.

Steriliseren

De kolf wordt in de autoclaaf geplaatst om het medium 20 minuten bij 121 ° C te steriliseren.

Bloed aggregeert

Bij het verlaten van de autoclaaf mag het staan ​​tot de temperatuur van het medium ongeveer tussen 56 en 70 ° C is om het bloed te plaatsen en te mengen tot het medium bruin wordt.

Als u supplementen toevoegt, is dit het moment om het te doen. Meng vervolgens en serveer 20 ml in elke steriele petrischaal.

De hele procedure moet worden uitgevoerd in een afzuigkap met laminaire stroming of rond de bunsenbrander.

Laat staan ​​tot ze stollen en bewaar ze omgekeerd in de koelkast.

Een andere manier om chocolade-agar te bereiden zonder bloed te gebruiken

Het basismedium wordt bereid zoals hierboven beschreven, het commercieel verkregen gedehydrateerde hemoglobine wordt opgelost en gesteriliseerd in de autoclaaf.

Beide oplossingen mogen afkoelen tot 50 ° C, worden samengevoegd en het supplement wordt toegevoegd. Meng onder aseptische omstandigheden en serveer in steriele petrischalen.

QA

Het is belangrijk dat het bloed op de aangegeven temperatuur wordt geplaatst, omdat het ideaal is om de rode bloedcellen te lyseren en tegelijkertijd factor V te behouden, die warmtegevoelig is.

Er mogen geen luchtbellen op het oppervlak van de agar achterblijven. Van elke batch van 100 platen moeten een of twee platen gedurende 24 uur in de oven bij 37 ° C worden geïncubeerd om hun steriliteit te verifiëren.

Voor het beste resultaat moet chocolade-agar kort na bereiding worden gebruikt.

Controlebacteriestammen moeten in het laboratorium worden bewaard om de werkzaamheid van het verse medium voor de groei van de belangrijkste veeleisende micro-organismen van klinisch belang te beoordelen.

Referenties

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktische klinische microbiologie. Universiteit van Cadiz, 2e editie. UCA Publications Service.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Argentinië. Redactioneel Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5e ed.). Argentinië, Redactie Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Haalbaarheid van het gebruik van het GC-Biocen Agar-basiskweekmedium in het Microbiology Laboratory. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Beschikbaar op: scielo.sld.
5. Wikipedia-bijdragers. Chocolade agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 17 december 2018, 19:54 UTC. Beschikbaar op: en.wikipedia.org.