De cetrimide-agar of cetrimide is een selectief vast kweekmedium dat is ontworpen voor de isolatie van Pseudomonas aeruginosa. Het is gebaseerd op het tonen van de productie van karakteristieke pigmenten van deze soort en is gemaakt van de modificatie van Tech-agar, gemaakt door King, Ward en Raney.
De oorspronkelijke formule bevatte zouten van magnesiumchloride, kaliumsulfaat, pancreasvertering van gelatine en agar-agar. De wijziging van de formule bestond uit de toevoeging van cetrimide (cetyltrimethylammoniumbromide) en glycerol.
Cetrimide-agar gezaaid met Pseudomonas aeruginosa Bron: BiotechMichael, van Wikimedia Commons
Cetrimide-agar is nuttig voor de microbiologische studie van monsters waarbij de aanwezigheid van Pseudomonas aeruginosa wordt vermoed. Opgemerkt moet worden dat deze bacterie buitengewoon belangrijk is, want hoewel hij deel uitmaakt van de normale microbiota in de omgeving, gedraagt hij zich vaak als een opportunistische ziekteverwekker.
Om deze reden is een van de meest voorkomende problemen die door deze kiem worden veroorzaakt, nosocomiale infecties, dat wil zeggen infecties die optreden in de ziekenhuisomgeving en die patiënten aanvallen met een verzwakt immuunsysteem.
Aan de andere kant, vanwege de affiniteit die dit micro-organisme heeft met vocht, zijn de meest kwetsbare besmettingsdoelen: ondersteunde ademhalingsapparatuur, medicijnen, vernevelaars, waterbronnen, airconditioners, ontsmettingsmiddelen, zeepoplossingen, injecteerbare oplossingen, open wonden , katheters, urinebuizen, onder anderen.
In die zin is cetrimide-agar nuttig om microbiologische controles en culturen uit te voeren op de eerder genoemde elementen.
Basis
Cetrimide-agar is gebaseerd op het vermogen van het medium om de groei van P. aeruginosa te bevorderen, de productie van zijn pigmenten te stimuleren en op zijn beurt de groei van andere micro-organismen te remmen.
Deze eigenschappen zijn te wijten aan de functie van elk van de componenten. Het aanwezige gelatine pepton dient als bron van stikstof, vitamines en mineralen. Glycerol of glycerine werkt als koolstofbron.
Van zijn kant is cetrimide (cetyltrimethylammoniumbromide) de stof die de groei remt van andere bacteriën dan P. aeruginosa, inclusief andere soorten die tot hetzelfde geslacht behoren.
Remming treedt op omdat cetramide werkt als een kationisch detergens, waardoor het de plasmamembraan van de meeste bacteriën kan destabiliseren, behalve P. aeruginosa en enkele andere die erin slagen te overleven.
Aan de andere kant bevat het magnesiumchloride en kaliumsulfaat. Deze verbindingen stimuleren fenotypische expressie die verband houdt met het vermogen van Pseudomonas aeruginosa om verschillende pigmenten te produceren, waaronder: pyocyanine, pyoverdin, pyorrubine, pyomelanine en fluoresceïne. Ten slotte bevat het agar-agar, waardoor het een stevige consistentie heeft.
Interpretatie
De interpretatie van de groei die in deze agar wordt verkregen, wordt als volgt uitgevoerd:
De waarneming van ronde, gladde kolonies met regelmatige randen, met de productie van blauwgroene, groene, bruine of roodachtige pigmenten, plus de uitstoot van fruitige geur (aminoacetofenon), is een vermoedelijk resultaat van de aanwezigheid van deze bacterie in dat monster.
Aan de andere kant is de waarneming van een helder groenachtig geel pigment op de kolonies een aanwijzing voor P. aeruginosa wanneer de plaat wordt blootgesteld aan ultraviolet licht.
Fluorescentie van P. aeruginosa kolonies op cetrimide agar onder ultraviolet licht.
Opgemerkt moet worden dat elke waargenomen kleur het gevolg is van de productie van een specifiek pigment. Het blauwgroene pigment komt overeen met de productie van pyocyanine, het groen met pyoverdin, het roodachtige met pyorubine, het bruine met pyomelanine en de heldere geelgroene fluorescentie onder UV-licht met fluoresceïne.
Voorbereiding
Weeg 43 g van het gedehydrateerde medium af en los op in gedestilleerd water. Voeg 10 ml glycerol toe. Breng het mengsel naar een warmtebron. Laat het een paar minuten koken tot het volledig is opgelost.
Autoclaaf gedurende 15 minuten op 121 ° C. Laat staan en serveer in steriele petrischalen als de temperatuur rond de 50 ° C is.
Laten stollen, omkeren, in plaqueros bestellen en tot gebruik in de koelkast bewaren. Cetrimide-agarplaten moeten vóór het zaaien uit de koelkast worden verwijderd en op kamertemperatuur worden gebracht.
De uiteindelijke pH van het medium moet 7,2 ± 0,2 zijn.
De kleur van het gedehydrateerde medium is beige en het preparaat is ondoorzichtig wit.
Toepassingen
Op cetrimide-agar kunnen allerlei monsters worden gezaaid waarin de aanwezigheid van Pseudomonas aeruginosa wordt vermoed. Daarom is het nuttig op alle gebieden van de microbiologie (milieu, industrieel, klinisch, water en voedsel).
Het is van groot belang om ziekenhuisomgevingen te analyseren en zo corrigerende maatregelen te kunnen nemen, aangezien dit micro-organisme de patiënt bereikt via besmette apparatuur, medicijnen, oplossingen en voorraden die door de patiënt worden gebruikt.
Op deze manier kan het micro-organisme de onderste luchtwegen, urinewegen en wonden van patiënten met immunosuppressie infecteren.
Kolonietellingen van P. aeruginosa kunnen ook worden gedaan in microbiële limiettesten.
Gezaaid
Cetrimide-agar kan als primaire cultuur worden gebruikt. De plaat wordt op een van zijn randen geïnoculeerd en van daaruit wordt hij door uitputting over de rest van de plaat verdeeld. Vloeibare monsters kunnen aan het oppervlak worden gezaaid met een drigalski-spatel.
De platen worden aëroob geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 24 uur incubatie.
Beperkingen
-Een klein percentage van Pseudomonas aeruginosas-stammen produceert geen pyocyanine, dus een vals-negatief kan worden geïnterpreteerd.
-Sommige Pseudomonas-soorten van klinisch belang worden in dit medium geremd.
-Ondanks het feit dat de kenmerken beschreven voor Pseudomonas aeruginosa in acht worden genomen, moeten ze worden bevestigd met aanvullende identificatietests. Een test die niet gemist mag worden is de oxidase test, deze moet positief zijn.
-Sommige Enterobacteriaceae kunnen in dit medium groeien en een geel pigment ontwikkelen, maar het verschilt van Pseudomonas aeruginosa doordat er geen fluorescentie is wanneer de plaat wordt blootgesteld aan ultraviolet licht.
- Serratia marcescens slaagt erin zich te ontwikkelen en produceert een roze pigment.
-Als de platen bezaaid met cetrimide-agar een tijdlang bij kamertemperatuur worden blootgesteld, kunnen de P. aeruginosa-stammen de fluorescentie verliezen die wordt waargenomen onder ultraviolet licht, maar de eigenschap wordt hersteld als ze opnieuw worden geïncubeerd bij 37 ° C.
QA
Om de goede prestatie van cetrimide-agar te analyseren, kunnen controlestammen worden gebruikt, zoals: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 en Staphylococcus aureus ATCC 25923.
De verwachte resultaten zijn:
- Goede groei voor P. aeruginosa, met blauwgroen pigment en positieve fluoresceïne.
- S. maltophilia en S. aureus zullen gedeeltelijk tot volledig geremd zijn.
- Escherichia coli wordt naar verwachting volledig geremd.
Referenties
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotypische en serologische karakterisering van klinische isolaten van Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa Laboratoria. Cetrimide-agarbasis. 2014. Beschikbaar op: condalab.com
- Britannia Laboratories. Cetrimide-agar. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
- BD Laboratoria. BD Pseudosel-agar (Cetrimide-agar). 2013 Beschikbaar op: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratory, CA Cetrimide-agar. 2009 Beschikbaar op: http://f-soria.es