BHI-AGAR: FOUNDATION, VOORBEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2025

Het BHI-agar- of Brain Heart Infusion-agarmedium is een voedzame vaste cultuur. In het Spaans noemen we het hersenhartinfusie-agar. Het is een niet-selectief kweekmedium, wat betekent dat alle soorten grampositieve en gramnegatieve bacteriën kunnen ontstaan, evenals enkele gist- en draadschimmels.

Het is samengesteld uit een infusie van kalfshersenen en -hart, peptisch hydrolysaat van dierlijke weefsels, pancreashydrolysaat van caseïne, natriumchloride, glucose, dinatriumfosfaat en agar.

BHI platen. Bron: foto gemaakt door de auteur MSc. Marielsa Gil.

Opgemerkt moet worden dat BHI-agar een van de meest gebruikte kweekmedia in bacteriologische laboratoria is. Het kan zonder supplementen worden gebruikt als primaire cultuur, subcultuur van kolonies verkregen op andere selectieve media of voor instandhouding van stammen in het laboratorium.

Anderzijds is het een ideaal medium om als basis te gebruiken bij de bereiding van verrijkte media, zoals bloedagar en chocoladeagar. Beide zijn ideaal voor het isoleren van veeleisende micro-organismen vanuit voedingsoogpunt. Er moet echter worden opgemerkt dat het, aangezien het glucose bevat, niet geschikt is voor het waarnemen van hemolysepatronen.

Evenzo kan BHI-agar worden gebruikt voor de bereiding van speciale media voor het isoleren van moeilijk te kweken pathogene micro-organismen in gangbare media, waaronder: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae en Histoplasma capsulatum.

Met het antibioticumadditief wordt BHI-agar een selectief medium voor de isolatie van schimmels.

Basis

Het is een voedzaam kweekmedium om matig veeleisende micro-organismen te isoleren, en de verrijking ervan kan worden verhoogd door toevoeging van bloed en andere voedingssupplementen.

Het is een niet-selectief kweekmedium, daarom laat het de groei van de meeste grampositieve en gramnegatieve bacteriën toe, evenals enkele schimmels. Het kan echter selectief worden gemaakt door de toevoeging van antibiotica.

Het medium bevat infusie van kalfshersenen en -hart, peptisch hydrolysaat van dierlijke weefsels en pancreashydrolysaat van caseïne; Al deze verbindingen fungeren als bronnen van vitamines, aminozuren, stikstof en koolstof.

Glucose is een koolhydraat dat energie levert aan micro-organismen nadat ze het hebben gefermenteerd. Ondertussen handhaven natriumchloride en dinatriumfosfaat het osmotische evenwicht en zorgen voor een pH die bijna neutraal is. Ten slotte geeft de agar de medium vaste consistentie.

Voorbereiding

Weeg 52 gram van het gedehydrateerde medium af en los het op in een liter gedestilleerd water. Breng het mengsel op een warmtebron tot het kookt, onder regelmatig roeren tijdens het oplossingsproces.

BHI-agarplaten of -wiggen kunnen zonder toevoegingen worden bereid.

Wiggen

Voor de bereiding van wiggen, serveer de bereiding tot de helft van elk buisje gevuld is, dek af en steriliseer gedurende 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ° C, leg ze op een basis totdat ze stollen. Later tot gebruik in de koelkast bewaren.

BHI-wiggen voor bacterioteca. Bron: foto gemaakt door de auteur MSc. Marielsa Gil.

Borden

Het opgeloste mengsel wordt gedurende 15 minuten geautoclaveerd bij 121 ° C, laat het afkoelen tot 50 ° C en 20 ml van het medium wordt geserveerd in steriele petrischalen. Ze mogen stollen, worden omgekeerd en tot gebruik in de koelkast bewaard. Laat de platen op kamertemperatuur komen voordat u gaat zaaien.

De pH van het medium moet op 7,4 ± 0,2 blijven.

Het ruwe medium is beige van kleur en het bereide medium is licht amberkleurig.

Bereiding van bloedagar

Na het steriliseren van het medium, koel af tot een temperatuur van ongeveer 45 tot 50 ° C, voeg dan het bloed (50 ml) toe, meng voorzichtig om te homogeniseren en serveer aseptisch 20 ml in elke petrischaal. Als zich belletjes op de plaat vormen, moet de aanstekervlam snel over de belletjes worden geleid om ze te verwijderen.

Evenzo kunnen speciale media worden bereid door de overeenkomstige additieven toe te voegen wanneer het mengsel een temperatuur van 45 tot 50 ° C bereikt.

Het medium blijft kersenrood.

Toepassingen

Gebruik zonder supplementen

De BHI-agar zonder toevoegingen is nuttig als primaire kweek en voor het zaaien van zuivere stammen van weinig of gemiddeld veeleisende micro-organismen voor hun latere identificatie.

Omdat het een lichtgekleurd medium is, is het ideaal voor het observeren van pigmenten en omdat het geen storende stoffen bevat, kunnen er enkele biochemische tests, zoals oxidase en catalase, op worden uitgevoerd, of kunnen andere biochemische tests worden opgezet vanuit kolonies hieruit. agar.

Evenzo worden BHI-agarwiggen veel gebruikt voor het behoud van stammen gedurende een bepaalde tijd in het laboratorium (bacterioteca).

De aan het oppervlak gezaaide platen of wiggen met bacteriestammen worden 24 tot 48 uur bij 37 ° C geïncubeerd. Ondertussen zullen bij schimmels de temperatuur en incubatietijd afhangen van het type schimmel dat wordt gezocht.

Als basisagar voor de bereiding van andere media

Met deze basis kunnen verrijkte en selectieve media worden bereid.

Verrijkt

De belangrijkste functie is om te dienen als basis voor de bereiding van bloedagar voor routinematig gebruik in microbiologische laboratoria. Vooral de BHI-base is bevorderlijk voor de isolatie van Streptococcus sp. Het heeft echter het nadeel dat het niet geschikt is voor het waarnemen van hemolysepatronen omdat het glucose bevat.

Het wordt ook gebruikt bij de bereiding van konijnen- of paardenbloedagar voor de isolatie van Haemophilus sp. Voor het beste resultaat kan een verrijkingssupplement (IsoVitaleX) worden toegevoegd.

Als de monsters uit de luchtwegen komen, kan bacitracine aan de agar worden toegevoegd om de bijbehorende flora te remmen en de kans op herstel van de Haemophilus sp.

Als alternatief kan bloedagar (lam of mens) met cystinetelluriet worden bereid om Corynebacterium diphtheriae te isoleren. Evenzo is het nuttig om konijnenbloedagar te bereiden, met de toevoeging van cystine en glucose voor de isolatie van Francisella tularensis.

Het zaaien van het bloed agarplaten wordt gedaan door uitputting en worden geïncubeerd bij 35-37 ° C gedurende 24-48 uur in microaerophilicity (5-10% CO ₂ ).

Selectief

Dit medium kan met toevoeging van antibiotica de Sabouraud-agar vervangen voor het isoleren van schimmels.

De combinatie van BHI-agar met chlooramfenicol - gentamicine of penicilline -, streptomycine en paardenbloed is ideaal voor het isoleren van Histoplasma capsulatum.

Afhankelijk van het te isoleren micro-organisme wordt incubatie bij 35-37 ° C of bij kamertemperatuur bij aerobiose aanbevolen. Soms is incubatie nodig in beide temperatuurbereiken, hiervoor worden 2 platen gebruikt.

Sommige schimmels, zoals Trichophyton mentagrophytes, moeten maximaal 7 dagen bij kamertemperatuur worden geïncubeerd.

QA

Van elke bereide batch wordt aanbevolen om 1 plaat of wig gedurende 24 uur bij 37 ° C te incuberen en te controleren of er geen groei is; Het is vooral belangrijk bij het bereiden van bloedagar, omdat het een gemakkelijk besmet medium is.

Aan de andere kant kan de kwaliteit van het medium worden beoordeeld door bekende of gecertificeerde standaardstammen te inoculeren en hun ontwikkeling te observeren.

Om BHI-agar zonder toevoegingen te evalueren, kunnen in die zin stammen van Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 of Candida albicans ATCC 10231 worden gebruikt.Ze worden gedurende 24 tot 48 uur bij 37 ° C in aerobiose geïncubeerd. In alle gevallen wordt een bevredigende groei verwacht.

Stammen van Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 of Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 kunnen worden gezaaid om bloedagarplaten te evalueren.

Bacteriestammen worden gedurende 24 uur bij 37 ° C in micro-aerofiliciteit geïncubeerd, terwijl de schimmel tot 7 dagen bij kamertemperatuur in een vochtige kamer wordt geïncubeerd. In alle gevallen wordt een bevredigende groei verwacht.

Referenties

1. Britannia Laboratories. Brain Heart Infusion Agar. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com.
2. BD Laboratoria. Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013 Beschikbaar op: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
4. Neogen-laboratorium. Brain Heart Infusion Agar. Beschikbaar op: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Blood agar: foundation, gebruik en bereiding. 2018 Beschikbaar op: lifeder.com.
6. Wikipedia-bijdragers. Hersenen hartinfusie. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 19 september 2018, 03:58 UTC. Beschikbaar op: wikipedia.org. Toegang tot 2 maart 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana SA Argentina.