BAIRD PARKER AGAR: FOUNDATION, VOORBEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De agar Baird Parker is een solide medium selectieve en differentiële cultuur. Het werd in 1962 gemaakt voor het detecteren en tellen van coagulase-positieve stafylokokken (Staphylococcus aureus).

Het bestaat uit pancreashydrolysaat van caseïne, vleesextract, gistextract, lithiumchloride, glycine, natriumpyruvaat, kaliumtelluriet, agar- en eigeelemulsie.

Typische Staphylococcus aureus-kolonies op Baird Parker-agar. Bron: Daizy John

Baird Parker Agar is gebaseerd op het vermogen van S. aureus om telluriet te verminderen en lecithinase te produceren. Beide eigenschappen genereren een kolonie met specifieke kenmerken voor deze soort. Daarom is het zeer effectief bij het detecteren van dit micro-organisme.

De typische kolonies van S. aureus zijn zwart of donkergrijs, met een kleurloze rand en een lichte halo die hen omringt, waardoor ze zich onderscheiden van andere micro-organismen. Deze ziekteverwekker kan worden gevonden in klinische monsters, water, cosmetica en rauw of gekookt voedsel.

De diagnose of detectie is van het grootste belang, vanwege de verscheidenheid aan pathologieën die het veroorzaakt, zoals voedselvergiftiging, scalded skin-syndroom, toxisch shocksyndroom, abcessen, meningitis, bloedvergiftiging, endocarditis, onder anderen.

Basis

Voedende kracht

Pancreas caseïnehydrolysaat, vleesextract en gistextract zijn de bronnen van voedingsstoffen, vitamines en mineralen die nodig zijn voor de algemene microbiële ontwikkeling, terwijl pyruvaat en glycine verbindingen zijn die de specifieke groei van Staphylococcus aureus ondersteunen.

Selectief

Baird Parker Agar is selectief omdat het stoffen bevat die de groei van de begeleidende flora remmen en tegelijkertijd de ontwikkeling van S. aureus bevorderen. De remmende verbindingen zijn lithiumchloride en kaliumtelluriet.

Differentiaal

Dit medium maakt het mogelijk S. aureus te onderscheiden van de rest van de coagulase-negatieve stafylokokken. S. aureus heeft het vermogen om telluriet te reduceren tot vrij metallic zwart tellurium, waardoor zwarte of donkergrijze kolonies ontstaan.

Evenzo levert het eigeel de substraten om de aanwezigheid van het enzym lecithinase en lipase aan te tonen. S. aureus is lecithinase-positief en daarom zal een duidelijke halo worden waargenomen rond de kolonie, wat aangeeft dat de lecithine gehydrolyseerd was.

In die zin duidt het verschijnen op deze agar van glanzend zwarte of donkergrijze kolonies met een lichte halo eromheen op de aanwezigheid van S. aureus.

Als zich een neerslagzone vormt, duidt dit op lipase-activiteit. Sommige stammen van S. aureus zijn lipase-positief en andere negatief.

In het geval dat S. aureus lipase-positief is, wordt een ondoorzichtig gebied rond de zwarte of donkergrijze kolonie waargenomen en vervolgens een lichte halo door de werking van lecithinase.

Kolonies van andere bacteriën dan S. aureus die op dit medium kunnen groeien, zullen kleurloze of bruine kolonies ontwikkelen zonder omringende halo.

Atypische zwarte kolonies zijn ook te zien met of zonder een kleurloze rand, maar zonder een lichte halo. Met deze kolonies moet geen rekening worden gehouden, ze komen niet overeen met S. aureus.

Voorbereiding

Emulsie van eigeel

Neem een ​​vers kippenei, was het goed en plaats het 2 tot 3 uur in alcohol 70%. Het ei wordt vervolgens aseptisch geopend en het eiwit wordt zorgvuldig van de dooier gescheiden. Daarna wordt 50 ml van de dooier genomen en gemengd met 50 ml steriele fysiologische oplossing.

Kaliumtelluriet 1% w / v

Sommige commerciële huizen verkopen 1% kaliumtelluriet, klaar voor gebruik. Het wordt aan het medium toegevoegd voordat het medium stolt.

Om deze oplossing in het laboratorium te bereiden, wordt 1,0 g kaliumtelluriet afgewogen en opgelost in een deel water. Vervolgens wordt de hoeveelheid water aangevuld tot 100 ml. De oplossing moet worden gesteriliseerd door middel van de filtratiemethode.

Bereiding van kweekmedium

Weeg 60 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 940 ml gedestilleerd water. Laat het mengsel ongeveer 5-10 minuten staan.

Pas warmte toe door het medium regelmatig te roeren om het oplossingsproces te verbeteren. Breng een minuut aan de kook. Steriliseer gedurende 15 minuten in de autoclaaf bij 121 ° C.

Laat staan ​​tot een temperatuur van 45 ° C en voeg 50 ml van de eigeelemulsie en 10 ml 1% telluriet toe. Meng goed en giet 15-20 ml op steriele petrischalen.

Laat stollen, bestel omgekeerd in plaquers en bewaar in de koelkast tot gebruik.

De uiteindelijke pH van het voorbereide medium moet 6,8 ± 0,2 zijn.

Wacht tot de plaat op kamertemperatuur is voordat u een monster zaait. Zaai de platen in door strepen of door te zaaien aan het oppervlak met een Drigalski-spatel.

De kleur van het gedehydrateerde medium is lichtbruin en de kleur van het bereide medium is licht amber.

Gebruik

Klinische monsters

De klinische monsters worden direct gezaaid, waarbij een deel van het materiaal aan het ene uiteinde van de plaat wordt afgevoerd en van daaruit wordt het door uitputting gestreept. Incubeer 24 tot 48 uur bij 35-37 ° C.

Voedselmonsters

Weeg 10 g van het voedselmonster af en homogeniseer in 90 ml 0,1% peptonwater, van daaruit worden indien nodig verdunningen bereid. Inoculeer de platen in drievoud met 0,3 ml van de bereide oplossingen en zaai ze op het oppervlak met een Drigalski-spatel. Incubeer 24 tot 48 uur bij 35-37 ° C.

Deze methodologie maakt het mogelijk om de typische verkregen kolonies te tellen en is ideaal wanneer de aanwezigheid van S. aureus wordt vermoed boven 10 CFU per g / ml monster.

Als wordt vermoed dat de hoeveelheid S. aureus klein is of als er veel bijbehorende flora is, wordt aangeraden om het monster te verrijken met trypticase-sojabouillon met 10% NaCl en 1% natriumpyruvaat. Dit bevordert de groei van S. aureus en remt de ontwikkeling van de bijbehorende flora. Troebele buisjes worden gezaaid op Baird Parker-agar.

Watermonsters

In een gesteriliseerd vacuümfiltratiesysteem wordt 100 ml studiewater gefiltreerd en vervolgens wordt het microporeuze membraan van 0,4 micron met een steriele tang verwijderd en op een Baird Parker-plaat geplaatst. Incubeer 24 tot 48 uur bij 35-37 ° C. Met deze techniek kunnen typische S. aureus-kolonies worden geteld.

QA

Bekende stammen zoals Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 of Proteus mirabilis ATCC 43071 kunnen worden gebruikt om de kwaliteit van Baird Parker-agar te evalueren.

In het geval van S. aureus ATCC-stammen is bekend dat ze telluriet verminderen, en ze zijn lipase- en lecithinase-positief. Daarom moet er een bevredigende ontwikkeling zijn en moeten convexe kolonies groeien met een zwart centrum en een kleurloze rand, met een ondoorzichtige halo en een lichte buitenste halo.

Van zijn kant wordt verwacht dat S. epidermidis zich slecht ontwikkelt op dit medium, met bruingrijze tot zwarte kolonies, zonder een lichte halo.

Voor E. coli en P. mirabilis wordt verwacht dat het geheel of gedeeltelijk wordt geremd. Bij groei zullen zich bruine kolonies ontwikkelen zonder een ondoorzichtig gebied of een lichte halo.

aanbevelingen

-Het medium mag niet worden verwarmd nadat de telluriet en het eigeel zijn toegevoegd.

-De bereiding van de eigeelemulsie en de toevoeging ervan in het midden is een zeer kwetsbare stap voor besmetting. Men moet uiterst voorzichtig zijn.

-Als er typische kolonies van S. aureus aanwezig zijn, moet dit worden bevestigd door een coagulase-test op die stam uit te voeren.

-Als er twijfelachtige resultaten zijn met coagulase, moeten andere bevestigende tests worden uitgevoerd.

- Pas op dat u de aanwezigheid van typische S. aureus-kolonies niet verwart met atypische zwarte kolonies.

Referenties

1. Wikipedia-bijdragers. Baird-Parker-agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 15 maart 2017, 19:36 UTC. Beschikbaar op: wikipedia.org/ Geraadpleegd op 18 februari 2019.
2. BD Laboratoria. Baird Parker Agar. 2006 Beschikbaar op: bd.com
3. Britannia Laboratories. Baird Parker agarbasis. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratoria. 2009. Baird Parker Agar. Beschikbaar op: http://f-soria.es/Inform
5. Britannia Laboratories. Kaliumtelluriet. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Vervoer van enterotoxigene Staphylococcus aureus type A, in nasofaryngeale uitstrijkjes bij voedselverwerkers. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezolaanse Standard Covenin 1292-89. (1989). Voedingsmiddelen. Isolatie en opsomming van Staphylococcus aureus. Beschikbaar op: sencamer.gob.ve