ONDERDOMPELINGSOLIE: SAMENSTELLING, KENMERKEN, TOEPASSINGEN - BIOLOGIE - 2024

De immersieolie is een stroperige heldere vloeistof met een hoge brekingsindex. Om deze reden wordt het veel gebruikt bij microscopische waarnemingen, omdat het de eigenschap heeft om licht te concentreren wanneer het door het 100x objectief van de microscoop gaat, waardoor het oplossend vermogen toeneemt.

Dit komt doordat er een viskeuze film wordt gevormd tussen het objectief en het uitstrijkje, waardoor wordt voorkomen dat de lichtstralen worden verstrooid wanneer ze de lucht bereiken, waardoor de lichtstralen naar het monster worden geconcentreerd.

Druppelaar met olie-immersie en microscoop gefocusseerd met 100X objectief met behulp van olie-immersie. Bron: Pixabay.com

Onderdompelingsolie wordt alleen gebruikt met het 100X-objectief. Daarom wordt het 100X-objectief ook wel een immersie-objectief genoemd. De rest staat bekend als droge doelen. Deze lens kan niet worden gebruikt zonder de immersie-olie, omdat de visualisatie zonder deze niet bevredigend zou zijn.

De belangrijkste functie van immersie-olie is om duidelijkere, scherpere en meer gedefinieerde beelden te bieden, waardoor details kunnen worden waargenomen die met andere lenzen niet mogelijk zouden zijn.

De eerste olie die voor dit doel werd gebruikt, was anijsolie, die werd gebruikt in combinatie met de eerste immersielens gemaakt door Giovanni Battista Amici. Dit voorkwam alleen chromatische aberratie, maar verhoogde de numerieke apertuur van het lenssysteem niet.

Daarna werd cederolie gebruikt, maar het had veel nadelen waardoor het niet meer werd gebruikt. Onder hen was de hoge zuurgraad, die op korte termijn de doelstellingen schaadde.

Vervolgens werden andere stoffen zoals water en glycerine gebruikt totdat er synthetische immersieoliën ontstonden, die beetje bij beetje werden verfijnd tot ze de huidige immersieolie bereikten, een complexe verbinding van organische substanties.

Samenstelling van immersieolie

De immersie-olie bestaat uit een mengsel van organische verbindingen zoals: terfenyl, gehydrogeneerde terfenyl, natuurlijke koolwaterstoffen en polybutenen.

Onderdompelingsolie-eigenschappen

Immersie olie is een lichtgele vloeistof, licht viskeuze uiterlijk, met een karakteristieke geur en een dichtheid tussen 0,92-0,99 g / cm ³ .

Dompelolie is niet oplosbaar in water en heeft een kookpunt van 340 ° C. De brekingsindex a (n 20 ° C / D): varieert van 1.482 - 1.516. Ondertussen is de flitsindex 110 ° C en varieert de viscositeit van 100 tot 120 mPa.s.

Dit product moet op de juiste manier worden afgevoerd, aangezien het ecotoxisch is. Met andere woorden, het is schadelijk voor het milieu en treft vooral waterdieren. Aan de andere kant is het irriterend voor de huid en slijmvliezen. Bij inslikken is het nefrotoxisch en cardiotoxisch.

Dompelolie is stabiel bij 15 tot 25 ° C, de temperatuur waarbij het moet worden bewaard.

Basisprincipes van immersieolie

Bij gebruik van lenzen met een sterkere vergroting, moet de intensiteit van het licht worden verhoogd. Veel van de lichtstralen gaan echter verloren omdat ze worden verstrooid wanneer ze de lucht bereiken (ruimte tussen het dekglaasje en de lens), en zelfs sommige stralen worden volledig gereflecteerd.

Immersie-olie heeft een brekingsindex die vergelijkbaar is met die van glas. Daarom, wanneer de olie in contact komt tussen de 100X-lens en het dekglaasje, worden de lichtstralen geconcentreerd.

De geconcentreerde stralen gaan door het monster en verscherpen het beeld, dat wil zeggen, vergroten de numerieke apertuur van het objectief en corrigeren voor chromatische en sferische aberraties.

Gebruik of toepassingen

Het gebruik van immersie-olie is noodzakelijk, vooral wanneer het nodig is om een ​​beeld op een bredere manier te observeren, met behulp van het objectief met de hoogste vergroting (100x objectief) om details te zien die essentieel zijn om een ​​diagnose te stellen.

Daarom wordt het veel gebruikt in microscopisch onderzoek op verschillende gebieden, zoals: histologie, cytologie, hematologie en bacteriologie. Het is bijvoorbeeld nuttig om de kenmerken van cellen en weefsels van een patiënt te bestuderen.

Het wordt ook gebruikt voor de analyse van bloeduitstrijkjes, waarbij we de kenmerken van hemoparasieten binnen en buiten de erytrocyten willen detailleren, evenals in grampreparaten, om de morfotintoriale kenmerken van de micro-organismen te definiëren.

Het wordt over het algemeen gebruikt in vaste bereidingen, aangezien het niet wordt aanbevolen in verse bereidingen. Dit komt doordat de oppervlaktespanning van de olie ervoor zorgt dat het dekglaasje beweegt, waardoor het monster tijdens observatie verschuift en analyse wordt voorkomen.

Aan de andere kant is immersieolie niet alleen nuttig bij conventionele lichtmicroscopie: het wordt ook gebruikt in microscopen met totale interne reflectiefluorescentie (TIRFM) en in confocale fluorescentietoepassingen.

Stappen om een ​​preparaat met immersieolie te observeren

Om een ​​objectglaasje onder een microscoop te bekijken, moet het objectglaasje eerst worden scherpgesteld met het objectief met de laagste vergroting, meestal de 10X, met een lage lichtintensiteit.

Daarna gaat het naar het 40X-objectief en wordt het lichtpad iets vergroot. Bij deze vergroting kunnen sommige analyses worden uitgevoerd, maar een vergroting van 100x is vereist om structurele details te zien.

Voordat u naar het 100x-objectief gaat, wordt een druppel immersie-olie op het dekglaasje geplaatst, precies waar u wilt observeren, en vervolgens wordt de microscoopkoepel verplaatst om het 100x-objectief in de voorbereiding te lokaliseren.

De intensiteit van het licht wordt geregeld (verhoogd) (door de condensor te verplaatsen en het diafragma te openen). Dan zouden een paar kleine bewegingen van de micrometerschroef (vooruit of achteruit) perfect moeten focussen als de microscoop parafocale objectieven gebruikt.

Als u de voorbereiding rechtstreeks met de immersielens probeert scherp te stellen, kan het zijn dat u de focus niet kunt vinden. Het is geen onmogelijke handeling, maar de moeilijkheidsgraad neemt aanzienlijk toe.

Zorg

Om de immersie-olie te gebruiken, moet aan bepaalde voorwaarden worden voldaan.

Wanneer een gekleurd preparaat is gemaakt, zoals een uitstrijkje gekleurd met Giemsa of een Gram, wacht dan tot het uitstrijkje volledig is opgedroogd voordat u de olie-immersie aanbrengt. Anders vormt de olie samen met het water micellen waardoor de bereiding niet te zien is.

Aan de andere kant, na het observeren van de batch bereidingen, dat wil zeggen aan het einde van de werkdag, moet het 100X-objectief zorgvuldig worden gereinigd met behulp van een lenspapier met ethanol. Als de lens vies wordt achtergelaten, zal de olie erop drogen en zal het erg moeilijk zijn om deze te verwijderen, waardoor het gezichtsveld wordt beschadigd.

Evenzo moet er rekening mee worden gehouden dat de olie brandbaar is en uit de buurt van warmtebronnen (aanstekers) moet worden gehouden. Het is belangrijk om het niet boven 65 ° C te verwarmen.

Ten slotte is olie een giftig product. Daarom moet direct contact met de huid en slijmvliezen worden vermeden, daar dit lichte irritatie kan veroorzaken. Om ongelukken te voorkomen, wordt het gebruik van handschoenen en een veiligheidsbril aanbevolen.

In geval van contact met de olie, moet het gebied met veel water worden gewassen. Als de olie in de ogen spat, moet deze op dezelfde manier worden gewassen, met de ogen open. In geval van accidentele inname, is het belangrijk om warm water in te nemen en braken op te wekken, naast het bezoeken van de dichtstbijzijnde arts.

Referenties

1. "Total Internal Reflection Fluorescence Microscope." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 30 december 2018, 22:46 UTC. 14 mei 2019, 01:54
2. IVD. Microscopie Olie-immersie. Beschikbaar op: Users / Team / Downloads.
3. Milieubiologie en microbiologie. Werking van de optische microscoop. Beschikbaar op: eumed.net/libros.
4. Sánchez Lera Rita María, Oliva García Ninfa Rosa. Geschiedenis van de microscoop en zijn impact op de microbiologie. Rev Hum Med, 2015; 15 (2): 355-372. Verkrijgbaar in: scielo.
5. Herrero J. Praktijk nr. 1: Grondbeginselen en gebruik van de gewone samengestelde optische microscoop. Universitat d´Alacant Beschikbaar op: rua.ua.es/dspace
6. Scharlau - MSDS. Onderdompelingsolie, voor microscopie. 2001. Beschikbaar op: insumos-labcentral.