THIOGLYCOLATE BOUILLON: GRONDGEDACHTE, BEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2025

De thioglycollaatbouillon is een medium verrijkte vloeibare consistentie. Het is bekend onder het acroniem FTM voor het acroniem in English Fluid Thioglycollate Medium. Het is gemaakt door Brewer en in 1944 aangepast door Vera, die er caseïne-pepton aan heeft toegevoegd.

Dit medium heeft een laag oxidatie-reductiepotentieel, daarom wordt het niet aanbevolen voor de ontwikkeling van strikt aërobe bacteriën, maar het is ideaal voor het herstellen van facultatief aërobe, strikt anaërobe en niet veeleisende microaerofiele bacteriën.

Thioglycolate bouillon zonder indicator. Toont vaginale afscheiding. Bron: Bobjgalindo

De hoge prestaties die met dit medium worden waargenomen bij het isoleren en terugwinnen van een grote verscheidenheid aan micro-organismen, hebben ervoor gezorgd dat het is geaccepteerd door de United States Pharmacopeia (USP), door de Official Association of Agricultural Chemists (AOAC) en door de European Pharmacopoeia ( EP).

Deze organisaties bevelen het aan voor het testen van steriliteitscontrole van farmaceutische producten en voor het verrijken van verschillende soorten monsters.

Het cado-thioglycolaat is samengesteld uit gistextract, pancreasvertering van caseïne, watervrije dextrose, L-cystine, natriumchloride, natriumthioglycolaat, resazurine en agar in kleine hoeveelheden.

Er zijn verschillende versies van dit medium, waaronder: thioglycollaatbouillon met indicator, thioglycollaatbouillon zonder indicator, thioglycolaatbouillon met indicator verrijkt met hemine en vitamine K _1, en thioglycollaatbouillon met calciumcarbonaat.

Met name de thioglycollaatbouillonvariant verrijkt met hemine en vitamine K dient om de groei van veeleisende anaëroben te versterken, en de thioglycollaatbouillonvariant die calciumcarbonaat bevat, is nuttig om de zuren die tijdens microbiële groei worden geproduceerd tegen te gaan.

Basis

Thioglycollaatbouillon wordt beschouwd als een niet-selectief verrijkingsmedium omdat het de groei van de meeste niet-kieskeurige bacteriën mogelijk maakt. De voedingsbehoeften worden geleverd door het gistextract, de pancreasvertering en glucose.

Aan de andere kant bevat dit medium, ondanks dat het een bouillon is, een kleine hoeveelheid agar; Dit betekent dat het een laag oxidatie-reductiepotentieel heeft, doordat het de toevoer van zuurstof vertraagt, zodanig dat zuurstof afneemt naarmate het dieper in de buis gaat.

Daarom is dit medium ideaal voor de ontwikkeling van facultatieve aërobe, microaërofiele en strikt anaërobe bacteriën, de laatste 2 zonder de noodzaak om onder deze omstandigheden te incuberen. Hetzelfde medium regelt de hoeveelheid zuurstof in het medium, afwezig op de bodem van de buis en in voldoende hoeveelheid op het oppervlak.

Evenzo werken thioglycolaat en L-cystine als reductiemiddelen en helpen ze de ophoping van stoffen te voorkomen die schadelijk zijn voor de ontwikkeling van bacteriën, zoals peroxide. Bovendien bevatten deze verbindingen sulfhydrylgroepen (-SH-), die de remmende effecten van kwikderivaten, arseen en andere zware metalen neutraliseren.

Resazurin van zijn kant is een indicator voor oxidatiereductie. Deze stof is kleurloos bij verkleining en roze bij oxidatie. Er zijn indicator- en niet-indicator thioglycolaatbouillonvarianten. Het gebruik ervan hangt af van het type monster en de voorkeur van het laboratorium.

Ondertussen handhaaft natriumchloride het osmotische evenwicht van de thioglycollaatbouillon en het gebruik van glucose in watervrije vorm voorkomt overmatig vocht in het gedehydrateerde medium.

Voorbereiding

Thioglycolaatbouillon met indicator

Weeg 29,75 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Het mengsel laat men ongeveer 5 minuten staan. Breng naar een warmtebron en roer regelmatig tot het volledig is opgelost.

Giet het medium in reageerbuizen en autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Laat afkoelen voor gebruik. Controleer de bijsluiter van het handelshuis voor het behoud ervan. Sommigen raden aan om op kamertemperatuur op een donkere plaats te bewaren, en anderen in een koelkast, beschermd tegen licht.

De pH van het bereide medium is 7,1 ± 0,2.

De kleur van het gedehydrateerde medium is lichtbeige en het bereide medium is licht amberkleurig met enige opalescentie.

Thioglycolate bouillon met indicator verrijkt met hemine en vitamine K

Er zijn commerciële media die al hemine en vitamine K _{1 bevatten} , vooral voor de teelt van anaëroben.

Als u niet over het verrijkte medium voor anaëroben beschikt, kunt u de basische thioglycolaatbouillon bereiden. Hiervoor wordt 10 mg heminehydrochloride en 1 mg vitamine K ₁ per liter medium toegevoegd. Als er echter bloed of serum aan de thioglycollaatbouillon wordt toegevoegd, is de toevoeging van hemine of vitamine K niet nodig.

Thioglycolate bouillon met calciumcarbonaat

Het wordt in de handel geleverd en wordt voorbereid volgens de instructies op de bijsluiter.

Thioglycolate bouillon zonder indicator

Dit heeft dezelfde samenstelling als het basische thioglycolaat, maar bevat geen resazurine.

Weeg 30 g van het gedehydrateerde medium af en los op in een liter gedestilleerd water. De rest van de bereiding is dezelfde als die beschreven in de thioglycolaatbouillon met indicator.

Gebruik

Thioglycollaatbouillon is nuttig voor de verrijking van klinische monsters, vooral die van steriele locaties. Het is ook handig voor niet-klinische monsters, zoals cosmetica, medicijnen, enz.

Voor het inoculeren van vloeibare monsters (zoals onder meer CSF, gewrichtsvloeistof) worden de monsters eerst gecentrifugeerd en vervolgens worden 2 druppels van het sediment genomen en in de thioglycollaatbouillon geplaatst. Incubeer 24 uur bij 35 ° C. Als er in deze tijd geen groei (troebelheid) is, wordt het maximaal 7 dagen geïncubeerd.

Als het monster wordt genomen met een wattenstaafje, wordt het kweekmedium eerst in platen geïnoculeerd en tenslotte wordt het wattenstaafje in de bouillon gebracht, het uitstekende deel wordt gespleten en de buis wordt afgedekt, waarbij het wattenstaafje binnen blijft. Incubeer 24 uur, maximaal 7 dagen bij 35 ° C.

Voor vaste monsters, homogeniseer in fysiologische zoutoplossing (SSF) en inoculeer de thioglycollaatbouillon met 2 druppels van de suspensie.

Het kan soms worden gebruikt als transportmedium voor monsters waar strikte anaëroben worden vermoed of als back-upverrijkingsbouillon.

De thioglycollaatbouillonvariant met calciumcarbonaat wordt gebruikt voor het behoud van controlestammen voor een langere tijd, omdat het de mogelijkheid heeft om de zuren die worden geproduceerd door het gebruik van glucose te neutraliseren; Deze zuren zijn giftig voor bepaalde bacteriën.

De groei in de thioglycollaatbouillon zal worden waargenomen door de troebelheid van het medium. Het wordt aanbevolen om een ​​Gramkleuring uit te voeren en vervolgens een subcultuur uit te voeren in niet-selectieve en selectieve media, afhankelijk van het type monster en de vermoedelijke micro-organismen.

QA

Voor steriliteitscontrole wordt aanbevolen om een ​​of twee bouillons zonder inoculatie te incuberen. Het verwachte resultaat is een heldere bouillon, zonder kleurverandering, hoewel het normaal is om een ​​lichte roze kleur op het oppervlak van de buis te zien.

Voor kwaliteitscontrole moeten tussen de 10 - 100 CFU gecertificeerde controlestammen worden geïnoculeerd, zoals Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437 sporogenes Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Incubeer 24 uur tot maximaal 3 dagen bij 30-35 ° C in aerobiose, aangezien deze micro-organismen snel groeien.

In alle gevallen wordt een goede ontwikkeling verwacht, behalve voor Micrococcus luteus en Bacillus subtilis, waar een matige ontwikkeling kan zijn.

Voor kwaliteitscontrole van thioglycollaatbouillon verrijkt met hemine en vitamine K ₁ kunnen de controlestammen Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 en Bacteroides fragilis ATCC 25285 worden gebruikt Het verwachte resultaat is een bevredigende groei.

aanbevelingen

- Af en toe kan worden opgemerkt dat het oppervlak van de thioglycolaatbouillon met indicator roze wordt; Dit komt door oxidatie van het medium. Als de roze kleur 30% of meer van de totale bouillon bedekt, kan deze gedurende 5 minuten in een waterbad worden verwarmd, opnieuw worden afgekoeld en gebruikt.

Hierdoor wordt de geabsorbeerde zuurstof verwijderd en krijgt het medium zijn oorspronkelijke kleur terug. Deze procedure kan maar één keer worden uitgevoerd.

-Om de groei van aerobe bacteriën te verbeteren, incubeert u met het deksel iets los. Het verdient echter de voorkeur om voor dit doel een hersen-hart-infusiebouillon of trypticase-sojabouillon te gebruiken voor de juiste ontwikkeling van strikte aeroben.

-Het bevriezen van het medium of oververhitting moet worden vermeden, aangezien beide omstandigheden het medium beschadigen.

-Direct licht beschadigt het kweekmedium, het moet beschermd tegen licht worden bewaard.

Referenties

1. Britannia Laboratories. Thioglycolaat USP met indicator. 2015 Beschikbaar op: labBritania.com.
2. Chios Sas Laboratoria. 2019. Thioglycolate bouillon. Beschikbaar op: quios.com.co
3. Laboratoria BD Fluid Thioglycolate Medium (FTM). 2003. Beschikbaar op: bd.com/Europe
4. BBL-media bereid in buisjes voor de kweek van anaërobe micro-organismen. Thioglycollate media. 2013 Beschikbaar op: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana SA Argentina.