LACTOSE BOUILLON: BASIS, BEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De lactosebouillon is een middel van een niet - selectief vloeibaar kweekmedium dat voornamelijk wordt gebruikt als voorverrijking bij de isolatie van salmonella-stammen van microbiologische analyse tot bewerkte voedingsmiddelen, zuivelproducten of water. Dit wordt aanbevolen door de International Commission on Microbiological Specificaties for Foods (ICMPF).

Het medium bevat enzymatische vertering van gelatine, vleesextract en lactose, stoffen die nodig zijn voor bacteriegroei. Bovendien is lactose een fermenteerbaar koolhydraat, daarom zijn sommige colibacteriën in staat om het af te breken bij de productie van gas.

Melkzuurbouillon met troebelheid. Bron: foto gemaakt door de auteur MSc. Marielsa gil

Om deze reden wordt lactosebouillon aanbevolen door de American Public Health Association (APHA) voor de vermoedelijke studie van totale en fecale colibacteriën, waardoor het wordt gekwalificeerd als een uitstekend alternatief om tryptose-laurylsulfaatbouillon te vervangen in de standaardtechniek van het meest waarschijnlijke nummer (MPN). ), gebruikt voor de microbiologische analyse van monsters van voedsel, melk en oppervlaktewater, ondergronds, recreatief, huishoudelijk en industrieel afval.

Basis

Voor de microbiologische analyse van sommige monsters is de voorverrijkingsstap essentieel om een ​​specifiek micro-organisme te kunnen terugwinnen dat zich in zeer kleine hoeveelheden of in ongunstige omstandigheden kan bevinden die de levensvatbaarheid ervan schenden of minimaliseren.

Dat is het geval bij gedroogde en bewerkte voedingsmiddelen, mogelijk besmet met Salmonellas sp. In deze gevallen, als de bacteriën aanwezig zijn, zijn ze tijdens het productieproces van het product fysiek en chemisch misbruikt.

Op een zodanige manier dat micro-organismen worden blootgesteld aan ongunstige factoren zoals uitdroging, blootstelling aan remmende of giftige producten, en de overlap gegenereerd door de aanwezigheid van andere bacteriën in grotere hoeveelheden, onder andere.

In die zin heeft de lactosebouillon een herstellend effect op de beschadigde structuren van het micro-organisme, waardoor het zich herstelt en zich zodanig voortplant dat het kan worden gedetecteerd.

Evenzo heeft de lactosebouillon het vermogen om de remmende stoffen te verdunnen die de levensvatbaarheid ervan kunnen beïnvloeden, waardoor de ontwikkeling ervan mogelijk wordt. Bovendien is de voedingssamenstelling van de lactosebouillon strategisch om de groei van Salmonella sp ten opzichte van andere micro-organismen te bevorderen.

Voor definitieve identificatie moet het worden gesubcultiveerd naar andere definitieve kweekmedia.

Anderzijds maakt de samenstelling van het medium het ook mogelijk om lactose-fermenterende micro-organismen die gas produceren op te sporen.

Voorbereiding

Om een ​​liter lactosebouillon te bereiden, moet 13 gram van het gedehydrateerde medium worden afgewogen en opgelost in 1000 ml gedestilleerd water.

Om het medium in het water op te lossen, kan de oplossing een beetje worden verwarmd, maar niet te veel.

Eenmaal homogeen, wordt de oplossing als volgt bereid: als de bouillon moet worden gebruikt om coliformen te zoeken, wordt een rek met reageerbuizen bereid, waarin een Durham-fermentatiebuis ondersteboven wordt ingebracht.

De Durham-buis is een zeer belangrijk detail, omdat het de detectie van gasvorming mogelijk maakt, een gegeven dat van grote waarde is bij het zoeken naar coliformen.

Als de buisjes klaar zijn, wordt er 10 ml van de lactosebouillon in gedoseerd, een hoeveelheid die voldoende moet zijn om de hele Durham-buis te bedekken.

Als de lactosebouillon moet worden gebruikt als voorverrijkingsbouillon, is het niet nodig om een ​​Durham-fermentatiebuisje te plaatsen. In dit geval is een grotere hoeveelheid medium nodig (225 ml), die wordt geserveerd in flessen van 500 ml, brede opening en met een hittebestendige schroefdop.

Vervolgens worden de buisjes of kolven 15 minuten geautoclaveerd bij 121 ° C.

Het medium moet op een uiteindelijke pH van 6,9 ± 0,2 bij 25 ° C blijven.

De bouillon wordt tot gebruik in de koelkast bewaard.

Voor gebruik moeten de bouillon op kamertemperatuur worden gebracht.

Aan de andere kant kan de lactosebouillon ook in dubbele concentratie worden bereid.

Sommige laboratoria voegen broomcresolpurper toe aan de lactosebouillon als pH-indicator, om de buisjes te laten zien waar de lactose is gefermenteerd vanwege de kleurverandering. In dit geval krijgt de bouillon een paarse kleur en als er gisting is, wordt deze geel.

Toepassingen

In microbiologische laboratoria wordt lactosebouillon veel gebruikt omdat het een relatief goedkoop medium is dat betrouwbare en snelle resultaten biedt (24-48 uur).

Het kan worden gebruikt voor de analyse van totale en fecale coliformen in voedsel en water of als voorverrijkingsbouillon voor Salmonella.

Voorverrijking

Voorverrijking is een stap voorafgaand aan de monsterverrijking, waardoor het herstel van bacteriën van het geslacht Salmonella in bewerkte voedingsmiddelen aanzienlijk wordt verbeterd.

Om dit te doen, wordt het vaste voedselmonster (25 gram) of vloeistof (25 ml) gezaaid in 225 ml lactosebouillon en gedurende 24 tot 48 uur geïncubeerd. Vervolgens wordt het ondergekweekt in een verrijkt medium zoals selenietcystinebouillon of tetrathionaatbouillon. Ga dan verder met XLD- en SS-selectieve media.

Totale en fecale coliforme analyse

Het is een uitstekend medium als indicator van fecale besmetting.

Om deze reden is lactosebouillon ideaal voor de vermoedelijke fase van het coliforme onderzoek volgens de Most Probable Number-methode.

Voor monsters waarin een grote hoeveelheid colibacteriën wordt vermoed, wordt een kleinere hoeveelheid ervan geïnoculeerd (1 ml), terwijl voor monsters waarin een kleinere hoeveelheid colibacteriën wordt vermoed, een groter volume monsters (10 ml) wordt geïnoculeerd.

Voor de analyse worden ^10-1 , ^10-2 , ^10-3 verdunningen gemaakt , die een batterij vormen van 3-5 buisjes voor elke gebruikte concentratie.

Van elke verdunning wordt hetzelfde volume in de lactosebouillon gezaaid.

De buisjes worden 24 uur geïncubeerd. Negatieve bouillons worden nog eens 24 uur geïncubeerd.

De interpretatie van de resultaten gebeurt door twee kenmerken te observeren: de eerste is de aan- of afwezigheid van troebelheid en aangezien dit medium geen pH-indicator bevat, zal er geen kleurverandering optreden.

De tweede is de productie of niet van gas. Gas is gemakkelijk te zien in de Durham-buis door het verschijnen van een of meer luchtbellen erin.

Het wordt als positief beschouwd als beide kenmerken worden waargenomen, dat wil zeggen troebelheid bij gasproductie. Positieve buisjes moeten opnieuw worden gezaaid in bevestigende media (2% Brilliant Green Bile-bouillon en EC-bouillon).

Kwaliteitscontrole van het medium

- Bij het bereiden van het medium is het belangrijk om niet te vergeten de Durhams-buisjes te plaatsen als het doel hiervan is om coliformen te bestuderen.

- Oververhit het medium niet alvorens te steriliseren.

- Verdeel in reageerbuizen vóór sterilisatie, nooit erna.

- Niet gebruiken als het medium meer dan 3 maanden oud is.

- Niet gebruiken als u enige verandering in de gebruikelijke eigenschappen van het medium waarneemt.

- Test bij het bereiden van een partij lactosebouillon de kwaliteit door bekende stammen te zaaien, zoals Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii en Klebsiella pneumoniae. Ze groeien erg goed, met gasproductie (positieve controle).

- Het kan ook Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium of Enterococcus faecalis omvatten, die goed groeien, maar zonder gasproductie (negatieve controle).

- Opgemerkt moet worden dat de oorspronkelijke kleur van het gedehydrateerde medium beige is en dat van het bereide medium erg licht en transparant geel is. Als er een verandering in kleur of uiterlijk wordt waargenomen, kan deze verslechteren.

Referenties

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M.Milieubiologie en microbiologie. (2013) 1e editie. Universiteit van Cartagenas, Colombia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B en Velázquez O. (2009). Technieken voor de microbiologische analyse van voedingsmiddelen. 2e ed. Faculteit Chemie, UNAM. Mexico.
3. Conda Pronadisa Laboratoria. 2017. Dubbele concentratie lactose-bouillon (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Vergelijking van technieken voor de extractie van colibacteriën uit het sediment van Lake Xochimilco, Mexico. Rev. argent. microbiol. 2013; 45 (3): 180-184. Beschikbaar op: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Bepaling van de microbiologische kwaliteit van artesische bronwateren in districten van de departementen Central, Cordillera en Capital Municipality. Mem Inst. Investig. Wetenschap. Gezondheid 2013; 11 (1): 5-14. Beschikbaar vanaf: scielo.iics.