EC-BOUILLON: BASIS, BEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2025

De EC-bouillon of bouillon Escherichia coli is een selectief vloeibaar kweekmedium. Dit medium wordt aanbevolen door de standaardmethoden voor het tellen van totale en fecale colibacteriën, volgens de meest waarschijnlijke nummertechniek (MPN) in water- en voedselmonsters, waarbij het belangrijkste middel Escherichia coli is.

EG-bouillon is samengesteld uit tripteïne, lactose, galzouten, dikaliumfosfaat, monokaliumfosfaat, natriumchloride en water. De formule is strategisch ontworpen om de groei van totale en fecale coliformen te bevorderen en de ontwikkeling van andere begeleidende micro-organismen te voorkomen.

Figuurlijke weergave van de bereiding van de EG-bouillon. Bron: Pixabay.com

De Escherichia coli-bacterie is het belangrijkste fecale colibacterium dat aanwezig is als verontreiniging in water en voedselbronnen en de oorzaak is van belangrijke gastro-intestinale stoornissen.

Opgemerkt moet worden dat er veel serotypen van Escherchia coli zijn; Onder hen kunnen we de enterohemorragische (EHEC), entero-invasieve (EIEC), enteopathogene (EPEC), enterotoxigene (ETEC) en enteroaggregatieve (EAEC) noemen.

Dit medium heeft het vermogen om ze allemaal te laten ontwikkelen, maar zonder ze van elkaar te kunnen onderscheiden. Dit vereist extra testen.

De microbiologische studie van water en voedsel op basis van het meest waarschijnlijke aantal (MPN) om te zoeken naar totale en fecale coliformen is een protocol dat uit verschillende fasen bestaat; vermoedelijke fase, bevestigingsfase en afrondingsfase. De EC-bouillon wordt gebruikt in de bevestigingsfase.

Basis

EG-bouillon

Het EC-medium is gebaseerd op het leveren van de voedingselementen die nodig zijn voor de optimale ontwikkeling van totale en fecale coliformen, waarin de Escherichia coli-bacterie is opgenomen.

Deze voedingselementen worden geleverd door tripteïne, een uitstekende bron van peptiden en aminozuren. Daarnaast bevat het ook lactose, een fermenteerbare koolhydraat die energie levert en laat zien of de bacteriën gas produceren.

Aan de andere kant bevat het medium galzouten die zorgen voor het selectieve karakter, aangezien het de groei remt van Gram-positieve micro-organismen die in het monster aanwezig kunnen zijn.

Evenzo werken dikaliumfosfaat en monokaliumfosfaat als een pH-balancerend systeem. Dit systeem is nodig, omdat de lactose in de bouillon de neiging heeft om het medium aan te zuren wanneer het wordt gefermenteerd door micro-organismen, maar dit wordt gecompenseerd door de fosfaatzouten.

Daarom zijn deze elementen essentieel, omdat ongecontroleerde zuurgraad de juiste ontwikkeling van de gezochte micro-organismen kan beïnvloeden.

Natriumchloride van zijn kant stabiliseert het medium osmotisch, terwijl water het oplosmiddel is voor de aanwezige opgeloste stoffen en zorgt voor de vloeibare consistentie van het medium.

Novobiocin gemodificeerde EC-bouillon

Okrend en Rose hebben een verscheidenheid aan EC-bouillon gemaakt, genaamd novobiocine-gemodificeerde EC-bouillon. De modificatie bestond uit het verlagen van de concentratie galzouten en het toevoegen van 20 mg / dl novobiocine.

Deze wijziging bevordert het herstel van enterohemorragische stammen van Escherichia coli (O157: H7).

Dit bacteriële serotype veroorzaakt ernstige hemorragische colitis die kan leiden tot hemolytisch uremisch syndroom (HUS); die op hun beurt acuut nierfalen kunnen veroorzaken, met een hoog sterftecijfer dat kan oplopen tot 50% bij ouderen.

Vanwege de jaarlijkse morbiditeit en mortaliteit die deze bacterie veroorzaakt door de consumptie van besmet voedsel, raadt het Amerikaanse ministerie van landbouw (USDA) het gebruik van dit medium ten zeerste aan.

Voorbereiding

EG-bouillon

Weeg 37,4 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Het mengsel moet 5 minuten staan. Vervolgens wordt het opgelost in een warmtebron door regelmatig te roeren.

Eenmaal opgelost, wordt het verdeeld in vooraf geconditioneerde reageerbuizen met een Durham-buis erin. Steriliseer gedurende 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ° C.

De pH van het medium moet 6,9 ± 0,2 zijn. De kleur van het gedehydrateerde medium is beige en het bereide medium is licht amber.

De bouillon wordt tot gebruik in de koelkast bewaard. Op het moment van gebruik moeten de bouillon op kamertemperatuur zijn.

Aan de andere kant kan de EC-bouillon ook in dubbele concentratie worden bereid.

Novobiocin gemodificeerde EC-bouillon

Weeg 36,7 g gedehydrateerd medium af en los op in 1 liter water. De rest van de bereiding is hetzelfde als hierboven beschreven.

Gebruik

Totale en fecale coliforme analyse

EC-bouillon is ideaal voor de bevestigingsfase van de studie van coliformen volgens de NMP-methode, zowel in watermonsters als in farmaceutische producten en voedsel.

Troebele, gasproducerende lactosebouillons die in de vermoedelijke fase zijn verkregen, moeten opnieuw worden gezaaid in 2% heldergroene galbouillon en EC-bouillon.

Voor totale coliformen worden EC-bouillons aëroob geïncubeerd gedurende 24 tot 48 uur bij 37 ° C, en voor fecale colibacteriën worden ze aëroob geïncubeerd gedurende 24 tot 48 uur bij 44 ° C.

In beide gevallen wordt het als volgt geïnterpreteerd: troebele buizen met gasproductie worden als positief beschouwd. Als er binnen 24 uur geen gasproductie is, duurt de incubatie maximaal 48 uur.

EC-positieve bouillon gaat naar de volledige bevestigingsfase, die bestaat uit het opnieuw zaaien op selectieve media zoals Mac Conkey-agar, EMB-agar of Endo-agar.

Als de gebruikte bouillon novobiocine-gemodificeerde EC is, wordt aanbevolen om positieve buisjes opnieuw te zaaien op Mac Conkey-agar met sorbitol.

QA

Elke batch bereid medium moet op kwaliteit worden gecontroleerd. Ten eerste moet de steriliteit van het medium worden beoordeeld. In die zin worden een of twee bouillons gedurende 24 uur bij 37 ° C zonder inoculatie in aerobiose geïncubeerd. Het verwachte resultaat is een transparante bouillon, zonder troebelheid of kleurverandering.

Ten tweede moet de groei van bekende stammen worden geëvalueerd, hiervoor kunnen de volgende bacteriën worden gebruikt: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

In alle gevallen wordt een bevredigende microbiële ontwikkeling verwacht, waarbij een troebele bouillon wordt waargenomen met gasproductie voor E. coli en geen gas voor salmonella.

Andere stammen die in de controle kunnen worden opgenomen zijn: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Deze stammen moeten volledig worden geremd.

aanbevelingen

-De plaatsing van de Durham-buisjes is essentieel voor de studie van coliformen.

- Verdeel het medium in de reageerbuizen vóór het steriliseren, nooit erna.

-Niet gebruiken als het medium meer dan 3 maanden oud is.

-Niet gebruiken als er een verandering in de gebruikelijke kenmerken van het medium wordt waargenomen.

Referenties

1. Britannia Laboratories. EC Medium. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
2. Enterohemorrhagische E. coli. Het Centrum voor voedselzekerheid en volksgezondheid. 2010 Beschikbaar op: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. EC-medium. Beschikbaar op: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Novobiocin gemodificeerd EC-medium. Beschikbaar op: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M.Detectie, isolatie en karakterisering van Escherichia coli die shiga-toxine produceert uit vers gemalen vlees van slagers in de provincie Concepción van Tucumán. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Beschikbaar op: www.scielo.org.