BIUREET: GRONDGEDACHTE, REAGENTIA, PROCEDURE, TOEPASSINGEN - BIOLOGIE - 2026

Het biureet is een reagens dat wordt gebruikt voor eiwitbepaling met lange en korte ketens. Het wordt vooral gebruikt op het gebied van analytische chemie en urineonderzoek om de concentratie van totale eiwitten in serum, plasma en urine te onderzoeken.

Eiwitwaarden kunnen bij bepaalde pathologieën worden verhoogd of verlaagd. Symptomen van hypoproteïnemie treden meestal op bij patiënten met een nieraandoening, bij ondervoede patiënten en bij patiënten met chronische infecties.

Chemische structuur van het complex gevormd in de biureetreactie Positieve biureet-test. Bron: Yikrazuul / flickr

Hoewel hyperproteïnemie wordt waargenomen bij pathologieën zoals multipel myeloom, systemische lupus erythematosus, bacteriële endocarditis, bacteriële meningitis, Macroglobulinemie van Waldenström, onder anderen.

Aan de andere kant is de aanwezigheid van eiwit in de urine te wijten aan de filtratie van albumine door de nieren. Dit is pathologisch gedrag dat moet worden bestudeerd.

In die zin is de biureet erg handig, omdat het de aanwezigheid van eiwitten in serum, plasma, urine en vele andere monsters kan kwantificeren.

Zelfs de biureet kan worden gebruikt om de aanwezigheid en concentratie van eiwitten in slecht onderzochte monsters of monsters met onbekende samenstelling te onderzoeken. Daarom wordt het veel gebruikt in het onderzoeksgebied.

De biureet-test is gebaseerd op het detecteren van peptidebindingen. De test vindt plaats in een alkalisch medium. Het monster moet ten minste twee peptidebindingen bevatten om een ​​violet-paars complex te vormen. Het complex wordt gevormd door de vereniging van de bindingen en het koperion.

Basis

Het reagens van Biureet is samengesteld uit kaliumhydroxide, koper (II) sulfaat en natrium- en kaliumtartraat. Natriumhydroxide wordt gebruikt om het medium alkalisch te maken, aangezien deze toestand essentieel is om de reactie te laten plaatsvinden.

De stoffen die reageren met eiwitten is koper (II) sulfaat, terwijl natriumtartraat de functie heeft om de vorming van koperhydroxide te verhinderen, dat neigt te neerslaan en de reactie verstoort.

Als er stoffen met peptidebindingen (polypeptiden of eiwitten) in het monster worden aangetroffen, is de test positief.

Een reactie wordt als positief geïnterpreteerd wanneer de oplossing paars wordt. De kleur wordt geproduceerd door de vorming van een complex tussen ten minste twee peptidebindingen met de CO-NH-groep en de cupri-kationen.

Het violette complex kan op twee manieren worden gevormd: de ene is door het verlies van protonen van de amidegroepen die aan het metaal binden (depronotatie), en de andere door de vereniging van de zuurstof- en stikstofelektronen die vrij zijn en binden. met koper.

Deze reactie kan variëren in intensiteit en kleur, afhankelijk van het type eiwit.

De test kan kwalitatief of kwantitatief worden uitgevoerd. In de kwalitatieve vorm wordt gerapporteerd als positief of negatief. In de kwantitatieve vorm kan de concentratie worden gemeten met de spectrofotometrische methode.

De reactie wordt gelezen tussen 540-560 nm. De intensiteit van de kleur is recht evenredig met de concentratie van peptidebindingen in het monster.

Reagentia

-20% natriumhydroxide (NaOH)

-Kopersulfaat pentahydraat 1% (CuSO _4. 5H ₂ O)

-Gemengd natrium- en kaliumtartraat-tetrahydraat (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Stabiliteit van biureetreagens

- Moet gekoeld bewaard worden.

Werkwijze

Techniek

-Plaats 100 µl van het te analyseren monster of de standaard in een reageerbuis.

-Voeg 2 ml natriumhydroxide toe.

-Meng heel goed.

-Voeg 5 ml Biureet-reagens toe.

-Meng en laat 25 minuten rusten bij kamertemperatuur, dek af en bescherm tegen licht.

-Let op de vorming van kleur of niet en meet spectrofotometrisch.

Kalibratiecurve

Runderserumalbumine kan als standaard worden gebruikt om de ijkcurve uit te voeren. Er worden verschillende concentraties van gemaakt. Bijvoorbeeld 25, 50, 75, 100, 125 en 150%.

De reactie wordt opgezet met al deze bekende concentraties en de absorptie wordt afgelezen bij een golflengte van 540 nm. Met de gegevens van de bekende concentraties en de absorptiemetingen wordt de ijkcurve gemaakt.

Bij elke bepaling of batch verwerkte monsters wordt aanbevolen om een ​​standaard te monteren. Runderserumalbumine 0,1-2 mg / ml kan als kalibratiestandaard worden gebruikt.

Metingen worden uitgevoerd op een spectrofotometer bij 540 nm.

Lineariteit wordt bereikt tot een concentratie van 12 g / dl.

Interferentie

Stoffen die de biureettest verstoren

Hoewel het niet vaak voorkomt, moet worden opgemerkt dat sommige stoffen kunnen interfereren tijdens de uitvoering van deze test. Zo kan de aanwezigheid van ammoniak kleurvorming remmen.

Evenzo kunnen andere stoffen met dezelfde golflengte absorberen, zoals bepaalde pigmenten.

Aan de andere kant kan interferentie worden gegenereerd wanneer een andere stof dan de peptidebinding een complex vormt met het koperzout. Voorbeeld: sommige koolhydraten en bepaalde lipiden.

Als het te analyseren monster een soort neerslag vertoont, moet het worden gefilterd of gecentrifugeerd voordat de test wordt uitgevoerd.

Stoffen die de biureet-test niet verstoren

De test wordt niet beïnvloed door de aanwezigheid van:

-Bilirubine tot een concentratie van 20 mg / dl.

-Hemoglobine tot een concentratie van 750 mg / dl.

-Dextran tot een concentratie van 30 g / L.

-Triglyceriden tot een concentratie van 4000 mg / dl.

Voordeel

-Het is een eenvoudige methode om uit te voeren.

- Het is een economische test.

-Het heeft een hoge specificiteit voor eiwitten.

- Weinig storing.

Nadelen

Het heeft een slechte gevoeligheid om kleine hoeveelheden eiwit te detecteren. Het werk van Fuentes et al. Bevestigt dat de biureet-testmethode een detectielimiet heeft van 1 mg / ml eiwit en een kwantificeringslimiet van 3 mg / ml.

Ander onderzoek uitgevoerd aan de Universiteit van Amazonia rapporteert echter veel lagere waarden. De door het onderzoek gerapporteerde detectielimiet is 0,020 mg / ml en de kwantificeringslimiet is 1,33 mg / ml.

Toepassingen

Het biureet-reagens of -test wordt gebruikt voor de bepaling van eiwitten in klinische en niet-klinische monsters in routine- en onderzoekslaboratoria.

Pathologieën die optreden bij een toename of afname van

Bij veel pathologieën is het belangrijk om de concentratie van totale eiwitten in klinische monsters te bepalen, die kan worden verhoogd of verlaagd.

Ze zijn verheven in:

-Meervoudig myeloom,

-Systemische lupus erythematosus,

-Bacteriële endocarditis,

-Bacteriële meningitis,

Waldenstrom's macroglobulinemie, onder anderen.

Het is verminderd in:

-Nierinsufficiëntie,

-Mensen met ernstige ondervoeding,

-Patiënten met o.a. chronische infecties.

Klinische monsters

De meest voorkomende klinische monsters zijn serum, plasma en urine. De normale waarde van eiwitten in serum of plasma is 6,0-8,8 gr / dl.

De concentratie van eiwitten in de urine bij volwassenen is niet hoger dan 150 mg / 24 uur.

Urine proteïne / urine creatinine ratio normale waarde

Zuigelingen: <0,50 mg

Kinderen van 2 jaar en ouder: index: 0,20 mg

Volwassenen: <0,2 mg

Niet-klinische monsters

De biureet-reactie kan worden gebruikt voor veel soorten niet-klinische monsters, zoals zuivelproducten, tegengif of een onbekende stof waarvoor u de aanwezigheid van eiwitten wilt onderzoeken.

Referenties

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Fysisch-chemische karakterisering en eiwitgehalte van vloeibare extracten van de mangrove-oester (Crassostrearizophorae). Cuban Journal of Chemistry, 26 (1), 66-74. Opgehaald op 26 juni 2019, via http: //scielo.sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Functionele karakterisering van de amandel van mangozaden (Mangifera indica L.) Revista Ciencia en Desarrollo. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biureet." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 19 juni 2019, 16:37 UTC. 26 juni 2019, 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, García J. Standaardisatie van de biureet-methode om totale eiwitten te kwantificeren in polyvalent antibotroop serum geproduceerd in het INS National Center for Biological Products. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Beschikbaar op: repositorio.ins.gob.pe
5. Winer Laboratoria. Totaal proteïnen. Colorimetrische methode voor de bepaling van het totaal aan proteïnen in serum en plasma. Beschikbaar op: wiener-lab.com.ar