BENGAALSE ROOS: GRONDGEDACHTE, PROCEDURE, KWALITEITSCONTROLE - GENEESMIDDEL - 2025

Rose Bengal is een laboratoriumtest op basis van een antigeen-antilichaamreactie voor de diagnose van brucellose. De techniek maakt de detectie mogelijk van specifieke antilichamen tegen de Brucella abortus-bacterie in menselijke serummonsters. Het resultaat kan kwalitatief of semi-kwantitatief worden gerapporteerd.

De kwalitatieve vorm geeft aan of de patiënt positief of negatief is voor de test, dat wil zeggen of er al dan niet antilichamen zijn. Ondertussen wordt het semi-kwantitatieve rapport gerapporteerd in IE / ml en geeft het de geschatte hoeveelheid aanwezige antilichamen aan. Opgemerkt moet worden dat antilichamen alleen worden geproduceerd als de patiënt in contact is geweest met het micro-organisme.

Rose Bengal-reactie in een agglutinatieplaat. Bron: overgenomen uit de video https://youtu.be/igAVQ-GiyGY

Vanwege zijn grote eenvoud, hoge gevoeligheid en specificiteit, is het een van de seroagglutinatietechnieken die in de geneeskunde het meest worden gebruikt als een eerste test voor de diagnose van deze ziekte.

Sommige onderzoekers hebben de werkzaamheid van de Rose Bengal-test vergeleken met andere technieken, zoals seroagglutinatie (febriele antigenen) en hebben opgemerkt dat, hoewel er een goede correlatie is, ze geïsoleerde gevallen zagen waarin de test met febriele antigeen negatief was en Rose de Positieve uitbarsting.

Het verkregen verschil was te wijten aan het feit dat deze patiënten een subklasse van IgG-antilichamen tegen Brucella abortus hadden met een betere bindingscapaciteit bij zure pH, en daarom konden ze reageren met het Rose Bengal-reagens maar niet met dat van febriele antigenen.

In die zin hebben ze gesuggereerd dat de reagentia van de febriele antigeentechniek worden gemodificeerd tot een zure pH, zodat ze dit soort gevallen kunnen detecteren.

Basis

Het Rose Bengal-reagens bestaat uit een antigene suspensie. Het bestaat uit de S99-stam van Brucella abortus, verdund in een zure lactaatbuffer (pH 3,6), plus fenol en de Rose Bengal-kleurstof.

Daarom wordt in het monster gezocht naar anti-Brucella-antilichamen, indien deze aanwezig zijn, zullen ze reageren met het reagensantigeen en zal een macroscopisch zichtbare agglutinatiereactie worden waargenomen. De test detecteert IgM-antilichamen of IgG-antilichamen.

Dit betekent dat het de ziekte kan detecteren in zowel het acute stadium waarin IgM-antilichamen de overhand hebben, als in het chronische stadium waarin IgG-antilichamen de overhand hebben.

Dit is een voordeel omdat het de gevoeligheid van de test verhoogt, maar tegelijkertijd is het een nadeel omdat het geen onderscheid maakt tussen het ene stadium en het andere, omdat de reactie met IgM- en IgG-antilichamen identiek is.

De test moet altijd samen met een negatieve controle en een positieve controle worden uitgevoerd. De negatieve controle bevat dierlijk serum zonder antilichamen en de positieve controle bevat serum van dierlijke oorsprong met 50 IE / ml anti-Brucella-antilichamen.

Gebruik

Brucellose is een ernstige ziekte die vaak chronisch en gevaarlijk is, dus het is erg belangrijk dat de diagnose vroeg wordt gesteld. Het is een zoönose en mensen kunnen besmet raken door direct contact met besmet materiaal. De meest kwetsbare mensen zijn dierenartsen en dierenverzorgers.

Infectie kan ook optreden door het eten van geïnfecteerd rauw vlees, naast andere vormen van infectie.

Deze ziekte valt lokaal of systemisch aan. De systemische vorm is de meest ernstige, aangezien verschillende organen kunnen worden aangetast, waaronder het reticulum-endotheliale systeem (lever, milt, beenmerg), huid (cellulitis en lymfadenopathie), ademhalingssysteem (pneumonie), bewegingsapparaat (artritis, sacroiliitis en spondylitis), onder anderen.

De Bengaalse Rose-test is een zeer nuttige techniek om een ​​eerste screening uit te voeren, omdat deze erg goedkoop is, gemakkelijk te gebruiken en een grote specificiteit en gevoeligheid heeft.

Gevallen van fout-negatieven en fout-positieven zijn zeer zeldzaam en kunnen optreden bij mensen met respectievelijk zeer lage antilichaamtiters (<25 IE / ml) of extreem hoge (> 1000 IE / ml).

Werkwijze

materialen

-Rose Bengal Kit

-Agglutinatie plaat witte achtergrond

-50 µl pipet

-Rotator (optioneel)

-Vortex

Techniek (kwalitatieve methode)

Commerciële Rose Bengal-sets worden geleverd met gebruiksklare reagentia.

-Temperatuur de reagentia voordat u begint te werken.

-Op de agglutinatieplaten zijn cirkels getekend, elk voor een ander monster. Gebruik 3 cirkels, de eerste voor de negatieve controle, de tweede voor het monster en de derde voor de positieve controle.

-Plaats een druppel of 50 µl van de controles en het monster in hun overeenkomstige cirkel.

-Meng het Rose Bengal-reagens met een vortex. Plaats een druppel naast de eerder geplaatste.

-Meng met houten tandenstokers (gebruik er een voor elk exemplaar of elke controle). Maak cirkelvormige bewegingen en spreid ze uit zodat je de hele cirkel bedekt.

Bron: afbeeldingen uit Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Bewerkte afbeeldingslay-out.

-Plaats de plaat op een automatische rotator op 80 tot 100 RPM of draai handmatig gedurende 4 minuten. Lees het bewijs aan het einde van deze tijd.

-Controleer of de bedieningselementen gaven zoals verwacht. Vergelijk de reactie van het testmonster met de controles. Rapporteer als positief als agglutinatie wordt waargenomen en als negatief als er geen agglutinatie is.

Een positieve test geeft aan dat de patiënt een hoeveelheid heeft die gelijk is aan of groter is dan 25 IE / ml anti-Brucella-antilichamen.

Interpretatie van een positieve (met agglutinatie) en negatieve (zonder agglutinatie) reactie. Bron: Citrulline. Bewerkte afbeelding.

Techniek (semi-kwantitatief)

Als in de kwalitatieve reactie het monster sterk positief is, kan het semi-gekwantificeerd worden. Hiervoor worden seriële dubbele verdunningen van het monster gemaakt met fysiologische zoutoplossing. De eerder beschreven procedure wordt bij elke verdunning uitgevoerd.

Het wordt ook geïnterpreteerd door de agglutinatie macroscopisch te observeren. Het resultaat is de titer van de hoogste verdunning waarin een positief resultaat werd waargenomen.

Om de geschatte waarde van anti-Brucella-antilichamen te berekenen, wordt de volgende formule gebruikt:

25 IU / ml x reactietiter = IU / ml

Als een patiënt in de semi-kwantitatieve test bijvoorbeeld positief test bij de ½, ¼ en 1/8 verdunning en negatief begint te worden vanaf de 1/16 verdunning, betekent dit dat de patiënt een titer heeft van 8 .

De formule toepassen:

25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml

QA

-De kits hebben een vervaldatum en deze moet worden gerespecteerd. Mag niet worden gebruikt als het reagens is verlopen.

-Zorg er tijdens het gebruik voor dat het reagens geen vaste deeltjes bevat, aangezien dit een teken van bederf is.

-Bewaar tussen 2 en 8 ° C.

-Niet in de vriezer bewaren, hierdoor wordt het reagens onherstelbaar beschadigd.

-Voer de test altijd samen met de negatieve en positieve controles uit.

-De techniek verdraagt ​​serummonsters met een bepaalde mate van lipemie en hemolyse, maar het wordt niet aanbevolen overdreven lipemische en gehemolyseerde sera te gebruiken, beide condities veranderen de resultaten van de test.

-Breng reagentia altijd op kamertemperatuur voordat u met de analyse begint.

-Interpreteer geen reacties die langer duren dan de aanbevolen tijd, aangezien dit het rapport van vals-positieven genereert, aangezien na een bepaalde tijd het reagens neerslaat, wat een positieve reactie simuleert.

-De techniek is 100% gevoelig en heeft een specificiteit van 98%.

-Na een semi-kwantificering van 1000 IU / ml is er de mogelijkheid om een ​​prozone-effect waar te nemen (vals-negatief door een teveel aan antilichaam vergeleken met de hoeveelheid antigenen).

Referenties

1. Rubio M, Barrio B en Díaz R. Waarde van de Rosa de Bengal-, Coombs- en contra-immuno-elektroforese-tests om gevallen van humane brucellose te diagnosticeren waarbij serumagglutinatie negatief is. Afdeling Microbiologie. Dienst voor klinische microbiologie. Universitaire kliniek. Universiteit van Navarra. 406-407. Beschikbaar op: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
2. "Brucellose." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 6 dec 2019, 14:37 UTC. 18 dec 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
3. Monlab Laboratoria. Monlab Bengaalse roos - test. 2016 Beschikbaar op: monlab.es/
4. Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Rev. Peru. Med Exp. Volksgezondheid 1997; 14 (1): 63-66. Beschikbaar op: scielo.org
5. Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A.Klinische, serologische en polymerase kettingreactie follow-up van een familie met brucellose. Rev. chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Beschikbaar op: scielo.conicyt.