COAGULASE-TEST: GRONDGEDACHTE, PROCEDURE EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De coagulase-test is een laboratoriumtechniek die wordt gebruikt om de aanwezigheid van het enzym coagulase aan te tonen. Dit enzym heeft de eigenschap plasma te coaguleren. Loeb was in 1903 de eerste die dit enzym beschreef.

Deze test wordt uitgevoerd op Gram-positieve, catalase-positieve kokken, waardoor de Staphylococcus aureus-stammen kunnen worden onderscheiden van de rest van de stafylokokken, aangezien dit het enige micro-organisme van klinisch belang is dat het produceert.

Beide afbeeldingen laten een positieve coagulase-test zien. Bron: afbeelding links: Philippinjl. Rechter afbeelding: foto gemaakt door de auteur MSc. Marielsa Gil.

In die zin worden leden van de Staphylococaceae-familie die negatief testen, vaak coagulase-negatieve Staphylococcus genoemd.

Er zijn enkele andere stammen dan S. aureus die coagulase kunnen produceren, zoals Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius en S. delphini.

De eerste drie zijn echter van klinisch belang op veterinair niveau en kunnen zeer zelden worden gevonden als veroorzaker van infecties bij mensen, terwijl S. delphini alleen in mariene omgevingen wordt aangetroffen.

Bovendien zijn ze gemakkelijk te onderscheiden omdat S. hyicus en S. intermedius mannitol niet fermenteren en S. schleiferi spp coagulans geen maltose of trehalose fermenteert, terwijl S. aureus deze koolhydraten wel fermenteert.

De aanwezigheid van het coagulase-enzym is in verband gebracht met de virulentie van de stammen. Deze theorie is echter uit elkaar gevallen, omdat andere virulente coagulase-negatieve soorten worden waargenomen die significante infecties kunnen veroorzaken.

Basis

Interpretatie

Agglutinatie binnen 5-20 seconden (sterk positieve test).

Variabele agglutinatie die optreedt tussen 20 seconden en één minuut (vertraagde positieve test).

Enige mate van agglutinatie na één minuut (twijfelachtig bewijs). Het wordt aanbevolen om de test te herhalen of te bevestigen met de buismethode.

Er is geen agglutinatie (negatieve test).

Resultaat met SSF. Het moet altijd negatief zijn, als het automatisch positief is, wordt het testresultaat ongeldig.

-Tube coagulase test

materialen

-Sterile reageerbuis

-Plasma

-Bad van Maria op 37 ° C.

Techniek

Pipetteer 0,5 ml plasma in een 12 x 75 reageerbuis met een steriele pipet. Laad de platina-lus met 2 tot 4 zuivere kolonies om 18 tot 24 uur te bestuderen vanuit een vaste kweek en los op in het plasma meng zorgvuldig en incubeer gedurende 4 uur bij 37 ° C.

Onderzoek de buis in het eerste uur zonder hem te schudden, kantel hem gewoon voorzichtig. Als er nog steeds geen stolsel wordt gezien, kan het elke 30 minuten worden waargenomen totdat de 4 uur voorbij zijn. Als het na 4 uur nog steeds negatief is, kan het maximaal 24 uur op kamertemperatuur worden bewaard. Observeer en rapporteer het resultaat.

Op basis van ervaring raden sommige microbiologen aan om 500 µl van een bacteriesuspensie uit een 18-uurskweek in vloeibaar medium te gebruiken om de test uit te voeren.

Het lijkt snellere en betrouwbaardere resultaten te bieden dan bij het emulgeren van kolonies uit vaste media, vooral als menselijk plasma is gebruikt dat is verkregen uit de bloedbank.

Het gebruik van stammen uit een bouillon helpt de mogelijke aanwezigheid van menselijke anti-stafylokokken-antilichamen in het plasma te verdunnen die de werking van coagulase kunnen remmen.

Interpretatie

Als een stolsel wordt gezien dat alle vloeistof omvat (volledig stolsel) of een stolsel dat helemaal niet in de resterende vloeistof zit (gedeeltelijk stolsel), moet dit als een positieve test worden beschouwd.

Als er geen stolsel wordt gevormd, dat wil zeggen dat de suspensie homogeen blijft, is de test negatief.

-Coagulase-test met fibrinogeen

Fibrinogeen wordt op dezelfde manier gebruikt als plasma en wordt zowel voor de glaasjes- als voor de buistests gebruikt. Ga te werk zoals beschreven voor plasma en interpreteer op dezelfde manier.

Gebruik

Het wordt gebruikt om Staphylococcus aureus te onderscheiden van coagulase-negatieve stafylokokken.

QA

Zorg dat er verse culturen van een S. aureus-stam beschikbaar zijn om als positieve controle te gebruiken. Een S. epidermidis-stam is ook beschikbaar als negatieve controle.

Beperkingen

-Een positieve test mag niet gedurende 24 uur in incubatie worden gelaten, aangezien S. aureus een fibrinolysine produceert dat het stolsel oplost.

-Voor een betrouwbare test moet vers of nieuw gereconstitueerd plasma worden gebruikt, en het is ook belangrijk om verse bacterieculturen te gebruiken (18 tot 24 uur). Dit voorkomt valse negatieven.

-De test moet samen met een negatieve en een positieve controle worden uitgevoerd.

-Sommige vaste media kunnen de coagulase-test verstoren. Het wordt niet aanbevolen om kolonies van zoute mannitol-agar te gebruiken.

-Als gecitreerd plasma wordt gebruikt, wordt aanbevolen om 5 eenheden heparine per ml plasma te plaatsen om valse positieven te voorkomen. Dit komt omdat sommige andere micro-organismen dan S. aureus citraat kunnen afbreken en ervoor zorgen dat het plasma stolt. In dit geval is het raadzaam om een ​​Gram- en een catalase-test te doen.

-Het is belangrijk om in de buistest de reactie elke 30 minuten te controleren, aangezien er stammen van S. aureus zijn die hoge concentraties fibrinolysine produceren en het nieuw gevormde stolsel snel verdunnen. Vermijd valse negatieven.

-Bij het volgen van de test, vermijd abrupt schudden van de buis, dit kan het begin van stolselvorming vernietigen die later niet zal worden hersteld, waardoor vals-negatieven ontstaan.

Referenties

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biochemische tests voor de identificatie van bacteriën van klinisch belang. 3e ed. Redactioneel Panamericana. Buenos Aires. Argentinië.
4. Pro-Lab Laboratoria. Konijn coaguleert plasma. Beschikbaar op: pro-lab.com
5. "Coagulase." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 12 februari 2019, 04:23 UTC. 22 april 2019, 15:50 wikipedia.org.