MEDIUM SIM: FOUNDATION, VOORBEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2025

Het SIM-medium is een halfvaste en differentiële agar, speciaal ontworpen om bepaalde bacteriën te helpen identificeren, vooral Enterobacteriaceae. Het is samengesteld uit tripteïne, pepton, ijzersulfaat, ammoniumsulfaat, natriumthiosulfaat en agar.

Met dit medium kunnen drie belangrijke tests worden uitgevoerd: de productie van waterstofsulfide (H ₂ S), de vorming van indool en beweeglijkheid, vandaar de afkorting SIM. Vanwege zijn grote bruikbaarheid kan het niet ontbreken in een bacteriologisch laboratorium.

A. Commercieel SIM-medium B. SIM H2S (-), Indool (-) en Motiliteit (+) Test en SIM H2S (+), Indool (-), Motiliteit (+) Test. Bron: A. Foto gemaakt door de auteur MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

In tegenstelling tot andere media, moet het halfvast zijn om het bewegingsvermogen van sommige bacteriën te kunnen detecteren. In die zin werkt deze test heel goed voor Enterobacteriaceae, maar niet voor niet-fermenterende Gram-negatieve staafjes, waar andere methoden de voorkeur hebben, zoals hangende druppel.

Het SIM-medium maakt het mogelijk om bepaalde specifieke eigenschappen te onderscheiden die sommige bacteriën kenmerken in relatie tot andere. Bijvoorbeeld wordt Escherichia coli onderscheiden als H ₂ S (-), Indool (+) en beweeglijkheid (+), terwijl Proteus mirabilis H ₂ S (+), indool (-), beweeglijkheid (+).

Basis

Het is een kweekmedium dat als differentieel wordt beschouwd, omdat het gebruik ervan onderscheid maakt tussen micro-organismen die waterstofsulfide kunnen produceren en micro-organismen die dat niet doen; het benadrukt ook diegenen die indool vormen van tryptofaan en degenen die dat niet doen, en tenslotte maakt het onderscheid tussen beweeglijke bacteriën en immobiele bacteriën.

Krachtbron

Zoals elk kweekmedium bevat het elementen die de nodige voedingsstoffen leveren, zodat niet-veeleisende micro-organismen zich kunnen ontwikkelen. Deze elementen worden vertegenwoordigd door peptonen en triptein.

De ontwikkeling van het micro-organisme in het medium is essentieel om de aan- of afwezigheid van de kenmerken die dit medium evalueert te kunnen waarnemen.

Productie van waterstofsulfide

De letter S van het acroniem SIM verwijst naar de productie van waterstofsulfide (H ₂ S). Bacteriën die waterstofsulfide kunnen vormen, zullen de zwavel uit natriumthiosulfaat opnemen.

Zodra de H ₂ S -colourless gas wordt gevormd, reageert met het ijzerzout in het medium onder vorming ferrosulfide, duidelijk zichtbaar (zwarte neerslag). Bacteriën die geen H ₂ S vormen, laten het medium van de oorspronkelijke kleur (beige) achter.

De aanwezigheid van het zwarte neerslag kan de interpretatie van motiliteit belemmeren. Van de meeste H ₂ S- producerende Enterobacteriaceae is echter bekend dat ze positief beweeglijk zijn, zoals Salmonella, Proteus en Citrobacter. Bovendien suggereert het zwarte neerslag dat bijna het hele medium bedekt, positieve beweeglijkheid.

Indool-formatie

De tweede letter van het acroniem SIM is "I", wat staat voor de vorming van indool.

In die zin vervult tripteïne, naast een bron van voedingsstoffen, nog een andere fundamentele functie. Dit pepton is rijk aan het aminozuur tryptofaan en kan daarom bacteriën laten zien die tryptofanase produceren.

Dit enzym is verantwoordelijk voor de splitsing van het aminozuur tryptofaan, met als gevolg de vorming van indool (kleurloze stof), pyrodruivenzuur en ammonium.

Daarom is het, om deze reactie te tonen, nodig om een ​​onthullende stof toe te voegen (Ehrlich's reagens of Kovac's reagens). Beide reageren met indool en vormen een rood-fuchsia ringvormige substantie op het oppervlak van de agar. Als de fuchsia-ring verschijnt, wordt de indooltest als positief geïnterpreteerd.

Bacteriën die dit enzym niet bezitten, zullen de ring niet vormen en het wordt geïnterpreteerd als een negatieve indooltest.

Het is belangrijk op te merken dat de indooltest de laatste moet zijn die moet worden geïnterpreteerd, aangezien zodra het reagens is toegevoegd, het medium troebel wordt, waardoor het moeilijk wordt om de beweeglijkheid te visualiseren.

Beweeglijkheid

Ten slotte betekent de letter "M" van het woord SIM beweeglijkheid. Om de beweeglijkheid te kunnen beoordelen, is dit medium strategisch halfvast, aangezien deze eigenschap essentieel is om te kunnen observeren of er bacteriële beweging is of niet. Bacteriën die flagella bezitten, zijn degenen die deze positieve test geven.

Een positieve test zal duidelijk zijn wanneer troebelheid wordt waargenomen, zowel in het initiële inoculum als eromheen. Terwijl niet-beweeglijke bacteriën zich alleen ontwikkelen op het pad van het eerste inoculum.

Voorbereiding

Middelgrote simkaart

Weeg 30 g van het gedehydrateerde medium af en los op in een liter gedestilleerd water. Het mengsel wordt 5 minuten met rust gelaten en vervolgens tot koken verhit, onder regelmatig roeren tot het volledig is opgelost.

Verdeel het mengsel in reageerbuizen met katoenen doppen en autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Haal het buizenrek uit de autoclaaf en laat het verticaal stollen, zodat het medium de vorm van een blok krijgt.

Om het te bewaren, wordt het tot gebruik in de koelkast bewaard. Het bereide medium moet een uiteindelijke pH hebben van 7,3 ± 0,2.

Op het moment van inoculatie moet het medium op kamertemperatuur zijn. De middelste kleur is beige.

Kovac's reagens

Meet 150 ml amyl-, isoamyl- of butylalcohol af. (Gebruik een van de drie genoemde).

Los 10 g p-dimethylaminobenzaldehyde op. Voeg vervolgens langzaam 50 ml geconcentreerd zoutzuur toe.

Het gebruiksklare reagens is kleurloos of lichtgeel. Het moet in een amberkleurige fles worden bewaard en in de koelkast worden bewaard. Niet gebruiken als het donkerbruin wordt; dat aangeeft dat het beschadigd is. Dit reagens heeft de voorkeur als het gaat om Enterobacteriaceae.

Erlich's reagens

Weeg 2 g p-dimethylaminobenzaldehyde af en los op in 190 ml absolute ethylalcohol en meng langzaam met 40 ml geconcentreerd zoutzuur. Bewaar op dezelfde manier het Kovac-reagens. Het reagens van Ehrlich wordt het meest gebruikt voor niet-fermenterende en anaërobe bacteriën.

Toepassingen

SIM-medium wordt veel gebruikt in bacteriologische laboratoria. Het voordeel is dat bij de identificatie van Enterobacteriaceae in dezelfde buis drie essentiële kenmerken kunnen worden waargenomen.

Gezaaid

De juiste manier om dit medium te zaaien, is met de naald, waarmee een deel van de te bestuderen zuivere kolonie wordt genomen en verticaal in het midden van het medium wordt gestoken. Er moet een enkele uitval worden uitgevoerd. De punctie mag de onderkant van de buis niet bereiken, het juiste is om slechts tweederde van de diepte te bedekken.

Het herhalen van het inoculum wordt niet aanbevolen, omdat dit kan leiden tot verkeerde interpretaties van positieve beweeglijkheid. Het geïnoculeerde medium wordt 24 uur aëroob bij 37 ° C geïncubeerd.

Na die tijd wordt waargenomen of er was productie van H ₂ S en de beweeglijkheid wordt gelezen. Eindelijk wordt de indool onthuld, voeg 3 tot 4 druppels van het Ehrlich- of Kovac-reagens toe, meng voorzichtig en interpreteer.

Bron: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana SA Argentina.

QA

Ter controle van de steriliteit worden één of twee buisjes zonder inoculatie gedurende 24 uur in een oven bij 37 ° C geïncubeerd. Verwacht wordt dat er na deze tijd geen groei of kleurverandering optreedt.

Als kwaliteitscontrole kunnen bekende gecertificeerde stammen worden gebruikt, zoals: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

De verwachte resultaten zijn: Escherichia coli H ₂ S negatief, indool en positieve motiliteit, Enterobacter aerogenes alleen positieve motiliteit, Salmonella typhimurium H ₂ S en positieve motiliteit, met negatief indool. Proteus vulgaris is allemaal positief, terwijl Klebsiella pneumoniae en Shigella allemaal negatief zijn.

Beperkingen

-Sommige stammen van Morganella morganii, naast andere stammen, kunnen in dit medium een ​​bruinachtig pigment produceren door de productie van melanine, dit moet niet worden verward met het neerslag van ferrosulfide. Bij onervaren professionals kan deze situatie vals-positieven genereren bij de interpretatie van de H ₂ S- test .

-Strikte aërobe bacteriën groeien alleen op het oppervlak van de buis, waardoor het moeilijk is om de beweeglijkheid te interpreteren.

Referenties

1. BD Laboratoria. BBL SIM-medium. 2008. Beschikbaar op: bd.com
2. Neogen Laboratories. SIM-medium. Verkrijgbaar bij: foodsafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM-medium. 2009 Beschikbaar op: http://f-soria.es
4. Brizuela-Lab Laboratorium. Middelgrote simkaart. Beschikbaar op: .brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Middelgrote simkaart. 2015 Beschikbaar op: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana SA Argentina.