TRYPTICASEÏNE-SOJABOUILLON: BASIS, BEREIDING EN GEBRUIK - BIOLOGIE - 2025

De sojabouillon-trypton is een vloeibaar kweekmedium, zeer voedzaam, niet-selectief. Vanwege zijn grote veelzijdigheid is het een van de meest gebruikte vloeibare kweekmedia in het microbiologisch laboratorium.

Het is ook bekend onder de naam tryptische sojabouillon of verteerde caseïne-soja, waarvan de afkorting TSB is voor het acroniem in het Engels Tryptic Soy Broth of CST voor het acroniem in het Spaans. Het gebruik ervan is zeer gevarieerd vanwege de samenstelling. Het is samengesteld uit tripteïne, sojapepton, natriumchloride, dikaliumfosfaat en glucose.

Trypticaseïne-sojabouillon gezaaid met een stam van Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 waar pigmentproductie wordt waargenomen. Bron: foto gemaakt door de auteur MSc. Marielsa Gil.

Het is in staat om klinisch belangrijke pathogene bacteriën te reproduceren, inclusief die welke uit voedingsoogpunt veeleisende en anaërobe bacteriën zijn. In deze omgeving kunnen zich ook enkele opportunistische en besmettelijke schimmels ontwikkelen.

Vanwege zijn hoge voedingskracht heeft het een hoge gevoeligheid om microbiële besmetting op te sporen, daarom werd het gekozen door de USDA Animal and Plant Health Inspection Service voor de microbiologische analyse van vaccins.

Evenzo voldoet trypticaseïne-sojabouillon aan de vereisten van de verschillende farmacopeeën (Europees EP, Japanse JP en Noord-Amerikaanse USP) voor de microbiologische studie van producten op industrieel niveau, zoals cosmetica en voeding.

Aan de andere kant is het vermeldenswaard dat dit medium ondanks zijn grote bruikbaarheid relatief goedkoop is, waardoor het betaalbaar is voor de meeste microbiologische laboratoria. Het is ook heel gemakkelijk te bereiden.

Basis

Triptein, pepton en glucose bieden essentiële voedingseigenschappen om het een ideaal medium te maken voor snelle microbiële groei.

In ongeveer 6 tot 8 uur incubatie is bij de meeste micro-organismen al groei te zien. Er zijn echter langzaam groeiende soorten die dagen nodig hebben om te groeien.

Natriumchloride en dikaliumfosfaat werken respectievelijk als osmotische balans en pH-regulator. De aanwezigheid van groei blijkt uit het verschijnen van troebelheid in het medium; als er geen groei is, blijft het medium doorschijnend.

Vanwege de lichte kleur is het mogelijk om de productie van pigmenten waar te nemen, zoals weergegeven in de afbeelding aan het begin van het artikel, wat overeenkomt met het pigment geproduceerd door Pseudomonas aeruginosa.

Voorbereiding

-Triptyseïne-soja-bouillon

Om tryptische sojabouillon te bereiden, moet 30 g van het gedehydrateerde commerciële medium op een digitale weegschaal worden gewogen. Vervolgens wordt het opgelost in een liter gedestilleerd water in een kolf.

Het mengsel wordt 5 minuten met rust gelaten en daarna naar een warmtebron gebracht om het medium te helpen oplossen. Het moet regelmatig worden geroerd terwijl het 1 minuut kookt.

Eenmaal opgelost, wordt het naar behoefte verdeeld in buizen van de juiste maat. Buizen met katoenen pluggen of met bakelieten doppen kunnen worden gebruikt. Vervolgens worden de buisjes gedurende 15 minuten gesteriliseerd met het medium in de autoclaaf bij 121 ° C.

De pH van het medium moet op 7,3 ± 0,2 blijven

Opgemerkt moet worden dat de kleur van het gedehydrateerde kweekmedium lichtbeige is en moet worden bewaard tussen 10 en 35 ° C, op een droge plaats. Terwijl de bereide bouillon licht amberkleurig is en in de koelkast (2 tot 8 ° C) moet worden bewaard.

-Varianten van trypticase in soja-bouillon

Gemodificeerde trypticaseïne-sojabouillon kan worden bereid door galzouten en novobiocine toe te voegen om het selectief te maken voor de isolatie van E. coli. Een andere optie voor hetzelfde doel is om trypticase-sojabouillon te bereiden, aangevuld met vancomycine, cefixime en telluriet (2,5 µg / ml).

Aan de andere kant kan meer glucose (0,25%) worden toegevoegd aan tryptische sojabouillon als het doel is om de vorming van biofilms te stimuleren.

Gebruik

Het is voedzaam genoeg om de groei van veeleisende of kieskeurige bacteriën, zoals Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp en Brucella sp, mogelijk te maken, zonder dat er bloed of serum nodig is.

Evenzo kunnen sommige schimmels zich in deze bouillon ontwikkelen, zoals Candida albicans Complex, Aspergillus sp en Histoplasma capsulatum.

Bovendien is dit medium onder anaërobe omstandigheden ideaal voor het terugwinnen van bacteriën die behoren tot het geslacht Clostridium, evenals niet-gesporuleerde anaërobe bacteriën van klinisch belang.

Als 6,5% natriumchloride wordt toegevoegd, kan het worden gebruikt voor de groei van Enterococcus en andere Groep D Streptococcus.

Op onderzoeksniveau is het zeer nuttig geweest in verschillende protocollen, vooral bij de studie van biofilm of biofilmvormende bacteriën. Het wordt ook gebruikt om de 0,5% Mac Farland-bacteriesuspensie te bereiden die nodig is om het antibiogram uit te voeren volgens de Kirby en Bauer-methode.

In dit geval worden 3 tot 5 kolonies met een vergelijkbaar uiterlijk genomen en geëmulgeerd in 4-5 ml trypticaseïne-sojabouillon. Het wordt vervolgens 2 tot 6 uur bij 35-37 ° C geïncubeerd en vervolgens met steriele zoutoplossing op de gewenste concentratie gebracht. Trypticaseïne-soja-bouillon mag niet worden gebruikt na 18 tot 24 uur incubatie.

Gezaaid

Het monster kan direct worden gezaaid of zuivere kolonies die uit selectieve media zijn genomen, kunnen in subcultuur worden gebracht. Het inoculum moet klein zijn om het medium vóór incubatie niet te vertroebelen.

Normaal wordt het gedurende 24 uur bij 37 ° C in aerobiose geïncubeerd, maar deze omstandigheden kunnen variëren afhankelijk van het gezochte micro-organisme. Het kan indien nodig ook enkele dagen onder anaërobe omstandigheden bij 37 ° C worden geïncubeerd. Snelgroeiende of kieskeurige micro-organismen kunnen bijvoorbeeld tot 7 dagen worden geïncubeerd.

Bij de microbiologische analyse van farmaceutische stoffen - zoals vaccins - zijn de protocollen strenger. In deze gevallen wordt de bouillon zonder groei niet weggegooid totdat deze 14 dagen continue incubatie heeft bereikt.

QA

Van elke bereide batch moeten 1 of 2 niet-geïnoculeerde buisjes worden geïncubeerd om hun steriliteit aan te tonen. Het moet ongewijzigd blijven.

Bekende soorten kunnen ook worden geplant om hun gedrag te beoordelen. Onder de soorten die kunnen worden gebruikt, zijn:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 of 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305, Longontsteking.

In alle gevallen moet de groei bevredigend zijn onder de juiste atmosfeer en temperatuuromstandigheden voor elk micro-organisme.

Beperkingen

-De fermentatie van glucose veroorzaakt een verlaging van de pH van het medium door de productie van zuren. Dit kan ongunstig zijn voor de overleving van sommige micro-organismen die gevoelig zijn voor zuurgraad.

-Het wordt niet aanbevolen voor het in stand houden van stammen, omdat bacteriën naast de zuurgraad na een paar dagen voedingsstoffen afbreken met de daaruit voortvloeiende ophoping van giftige stoffen die het milieu onherbergzaam maken.

-Je moet aan alle steriliteitsprotocollen werken, aangezien de bouillons gemakkelijk besmet zijn.

-Na het bereiden van de trypticasein-soja-bouillon, moet u niet proberen de bouillon over te brengen naar een andere steriele buis, omdat dit type manoeuvre erg kwetsbaar is voor besmetting.

Referenties

1. Cona E. Voorwaarden voor een goede gevoeligheidsstudie door middel van agar-diffusietest. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Beschikbaar op: scielo.org
2. Britannia-laboratorium. Triptein soja bouillon. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
3. MCD-laboratorium. Trypticasein Soja Bouillon. Beschikbaar op: electronic-systems.com
4. Neogen-laboratorium. Drieluik Soja Bouillon. Beschikbaar op: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Evaluatie van de magnetische immunoseparatietechniek voor het herstel van Escherichia coli O157: H7 in melkcrèmes. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Beschikbaar op: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilmvorming in Staphylococcus aureus-isolaten volgens antimicrobiële gevoeligheid en klinische oorsprong. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Beschikbaar op: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolatie van Escherichia coli O157: H7 in monsters van runderuitwerpselen met een dubbel doel uit de gemeente Miranda, de staat Zulia, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Beschikbaar op: scielo.org