BLOEDAGAR: GRONDGEDACHTE, GEBRUIK EN BEREIDING - BIOLOGIE - 2025

De bloedagar is een vast kweekmedium dat differentieel is verrijkt, maar niet-selectief. Het wordt gebruikt voor het terugwinnen en groeien van een grote verscheidenheid aan micro-organismen uit klinische monsters of voor subculturen.

Klassieke bloedagar moet worden opgenomen voor het zaaien van de meeste klinische monsters die in het laboratorium worden ontvangen; behalve voor ontlastingsmonsters waar het niet bruikbaar is, tenzij voorbereid met bepaalde aanpassingen.

Bloed agarplaat

Dit kweekmedium bestaat in wezen uit een verrijkte basisagar en 5% bloed. De agarbasis kan variëren naargelang de behoeften, maar zal voornamelijk bestaan ​​uit onder andere peptonen, aminozuren, vitamines, vleesextracten, natriumchloride, agar.

Wat bloed betreft, is het normaal gesproken vereist om contact te hebben met een vivarium om bloed te verkrijgen van dieren, zoals schapen, konijnen of paarden. Dit is echter niet altijd mogelijk en soms wordt menselijk bloed gebruikt.

Bloedagarmedium kan worden bereid in het laboratorium of kan kant-en-klaar worden gekocht bij gespecialiseerde bedrijven. De bereiding van dit medium is een van de meest delicate, elke onzorgvuldigheid bij de bereiding zal resulteren in een besmette batch.

Daarom moeten alle mogelijke voorzorgsmaatregelen worden genomen en moet er op het einde een kwaliteitscontrole worden uitgevoerd door bij 37 ° C 1 plaat per 100 die bereid wordt, te incuberen.

Basis

Staphylococcus aureus gekweekt op bloedagar. Nathan Reading op Flickr Nathan R. op Twitter, via Wikimedia Commons Het is al genoemd dat bloedagar de eigenschap heeft een verrijkt, differentieel en niet-selectief medium te zijn. De basis voor elk van deze eigenschappen wordt hieronder uitgelegd.

Bloedagar is een verrijkt medium omdat het als belangrijkste additief 5-10% bloed op agarbasis bevat. Beide verbindingen bevatten veel voedingsstoffen en dankzij deze eigenschap kunnen de meeste kweekbare bacteriën erin groeien.

Die groei vindt zonder beperking plaats; om deze reden is het niet-selectief. Als er echter verbindingen aan dit medium worden toegevoegd die de groei van sommige micro-organismen voorkomen en die van andere bevorderen, wordt het selectief. Dit is het geval als bepaalde soorten antibiotica of antischimmelmiddelen worden toegevoegd.

Evenzo is bloedagar een differentieel medium, omdat het het mogelijk maakt om 3 soorten bacteriën te onderscheiden: bèta-hemolytisch, alfa-hemolytisch en gamma-hemolytisch.

Beta-hemolytica zijn middelen die de mogelijkheid hebben om rode bloedcellen volledig te lyseren of te breken, waardoor ze een heldere halo vormen rond de kolonies, daarom produceren ze ß- of ß -hemolyse en worden de micro-organismen ß-hemolytisch genoemd.

Voorbeelden van ß-hemolytische bacteriën zijn Streptococcus pyogenes en Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolytische middelen zijn middelen die gedeeltelijke hemolyse uitvoeren, waarbij hemoglobine wordt geoxideerd tot methemoglobine, waardoor een groenachtige kleur rond de kolonies ontstaat. Dit fenomeen staat bekend als α of α -hemolyse en bacteriën worden geclassificeerd als α - hemolytisch.

Voorbeelden van α-hemolytische bacteriën zijn Streptococcus pneumoniae en Streptococcus van de viridans-groep.

Ten slotte zijn er de zogenaamde gamma-hemolytische of niet-hemolytische bacteriën. Deze groeien op de agar zonder er veranderingen op te veroorzaken, een effect dat bekend staat als γ -hemolyse, en de micro-organismen zijn γ -hemolytisch.

Voorbeeld van γ-hemolytische bacteriën: enkele stammen van groep D Streptococcus (Streptococcus bovis en Enterococcus faecalis).

Toepassingen

Het kweekmedium voor bloedagar is een van de meest gebruikte in het microbiologische laboratorium.

Onder de micro-organismen die in het bloedagarmedium kunnen groeien, zijn: strikt aërobe, facultatieve, microaërofiele, anaërobe, grampositieve of gramnegatieve bacteriën, snelgroeiende of langzaam groeiende bacteriën.

Sommige uit voedingsoogpunt veeleisende of kieskeurige bacteriën groeien ook, evenals schimmels en gisten. Evenzo is het nuttig voor het subkweken of reactiveren van stammen die metabolisch erg zwak zijn.

De keuze van de bloedgroep en de basis-agar zal echter variëren afhankelijk van het waarschijnlijke micro-organisme waarvan wordt vermoed dat het herstelt en het gebruik waarvoor de plaat zal worden gebruikt (kweek of antibiogram).

Keuze van bloedgroep

Het bloed kan lam, konijn, paard of mens zijn.

De meest aanbevolen is het bloed van lamsvlees, op enkele uitzonderingen na. Bijvoorbeeld om Haemophilus-soorten te isoleren, waarbij het aanbevolen bloed paarden- of konijnenbloed is, aangezien lamsbloed enzymen bevat die factor V remmen.

Het minst aanbevolen is menselijk, maar het wordt het meest gebruikt, misschien omdat het het gemakkelijkst te verkrijgen is.

Het bloed moet zijn gedefibrineerd, verkregen zonder enig type toevoegingsmiddel en van gezonde dieren. Bij het gebruik van menselijk bloed moet met verschillende factoren rekening worden gehouden:

Als het bloed afkomstig is van personen die bacteriële infecties hebben gehad, zullen ze specifieke antilichamen hebben. Onder deze omstandigheden wordt de groei van sommige bacteriën waarschijnlijk geremd.

Als het wordt verkregen uit de bloedbank, bevat het citraat en het is mogelijk dat bepaalde bacteriën in zijn aanwezigheid niet groeien. Als het bloed daarentegen afkomstig is van patiënten die antibiotica gebruiken, kan de groei van gevoelige bacteriën worden geremd.

En als het bloed afkomstig is van iemand met diabetes, verstoort de overtollige glucose de juiste ontwikkeling van hemolysepatronen.

Keuze uit het basistype

De basisagar die wordt gebruikt voor de bereiding van bloedagar kan erg breed zijn. Onder hen zijn: voedingsagar, hersenhartinfusie-agar, trypticase-soja-agar, Müeller Hinton-agar, Thayer Martin-agar, Columbia-agar, Brucella-agar, Campylobacter-agar, enz.

Gebruik van bloedagar volgens het basismedium dat voor de bereiding wordt gebruikt

Voedingsagar

Deze basis wordt het minst gebruikt, omdat er voornamelijk niet-veeleisende bacteriën op groeien, zoals onder andere enterische bacillen, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp. Het wordt niet aanbevolen om Streptococcus te isoleren.

Brain Heart Infusion Agar (BHI)

Het is een van de meest gebruikte als basis voor bloedagar, omdat het de nodige voedingsstoffen bevat voor de groei van de meeste bacteriën, waaronder Streptococcus sp en andere veeleisende bacteriën. Hoewel het niet gepast is om patronen van hemolyse te observeren.

Met deze basis wordt meestal lamsbloed gebruikt.

Bloedagarvarianten kunnen ook worden bereid, waarbij andere verbindingen worden toegevoegd om bepaalde micro-organismen te isoleren. Brain Heart Infusion Agar aangevuld met konijnenbloed, cystine en glucose kan bijvoorbeeld worden gebruikt om Francisella tularensis te isoleren.

Terwijl het met cystinetelluriet nuttig is voor de isolatie van Corynebacterium diphteriae. Menselijk bloed of lamsbloed kan worden gebruikt.

Bij de eerste beta-hemolyse wordt deze als een smalle halo gezien, terwijl bij de tweede de halo veel breder is.

Evenzo wordt deze basis, samen met bacitracine, maïszetmeel, paardenbloed en andere verrijkingssupplementen (IsoVitaleX), gebruikt voor het isoleren van het geslacht Haemophilus sp uit respiratoire monsters.

Ook als de combinatie van antibiotica chlooramfenicol - gentamicine of penicilline - streptomycine met paardenbloed wordt toegevoegd, is het ideaal voor het isoleren van veeleisende pathogene schimmels, zelfs met een hogere opbrengst dan Sabouraud glucose agar. Het is vooral nuttig bij het isoleren van Histoplasma capsulatum.

Trypticase soja-agar

Deze basis wordt het meest aanbevolen voor een betere observatie van het hemolysepatroon en voor het uitvoeren van diagnostische tests zoals optoquine taxa en bacitracine. Het is de klassieke bloedagar die routinematig wordt gebruikt.

Met deze basis kun je ook de speciale bloedagar voor Corynebacterium diphteriae maken, met cystinetelluriet en lamsbloed .

Evenzo is de combinatie van deze agar met lamsbloed plus kanamycine-vancomycine ideaal voor de groei van anaëroben, vooral Bacteroides sp.

Müeller Hinton-agar

Deze basis aangevuld met bloed wordt gebruikt om het antibiogram uit te voeren van kieskeurige micro-organismen, zoals Streptococcus sp.

Het is ook nuttig voor het isoleren van bacteriën zoals Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar

Dit medium is ideaal als basis voor bloedagar wanneer het geslacht Neisseria wordt vermoed, vooral Neisseria meningitidis, aangezien N. gonorrhoeae niet op bloedagar groeit.

Het wordt ook gebruikt om te testen op gevoeligheid voor Neisseria meningitidis.

Columbia-agar

Deze basis is uitstekend geschikt voor het zaaien van maagbiopsiespecimens voor Helicobacter pylori.

Het medium wordt bereid door 7% lamsbloed toe te voegen dat is gedefibrineerd met antibiotica (vancomycine, trimethoprim, amfotericine B en cefsulodine) om de groei van andere soorten bacteriën die aanwezig kunnen zijn, te beperken.

Dezelfde base aangevuld met menselijk of lamsbloed, nalidixinezuur en colistine is nuttig voor het isoleren van Gardnerella vaginalis. Het is ook ideaal om de antimicrobiële gevoeligheid voor antibiotica van hetzelfde micro-organisme te beoordelen.

Bovendien wordt het gebruikt voor de bereiding van bloedagar voor de teelt van anaëroben, waarbij aminoglycosiden en vancomycine worden toegevoegd.

Deze basis zorgt voor een goede observatie van hemolysepatronen.

Brucella-agar

Dit medium dat als basis wordt gebruikt voor bloedagar samen met de toevoeging van vitamine K is ideaal voor de kweek van anaërobe bacteriën. In dit geval wordt het gebruik van lamsbloed aanbevolen.

Campylobacter-agar

Campylobacter-agar aangevuld met 5% schapenbloed en 5 antibiotica (cefalothine, amfotericine B, trimethoprim, polymyxine B en vancomycine), is het medium dat wordt gebruikt om Campylobacter jejuni te isoleren in ontlastingsmonsters.

Voorbereiding

Elk handelshuis brengt de instructies om een ​​liter kweekmedium te bereiden op de achterkant van de container. Overeenkomstige berekeningen kunnen worden gemaakt om de gewenste hoeveelheid te bereiden, afhankelijk van de geselecteerde basisagar.

Weeg en los op

De basisagar is gedehydrateerd (poeder), daarom moet het worden opgelost in gedestilleerd water ingesteld op pH 7,3.

De hoeveelheid die wordt aangegeven door de gekozen basisagar wordt afgewogen en opgelost in de overeenkomstige hoeveelheid water in een kolf, vervolgens verwarmd op matig vuur en gemengd met roterende bewegingen totdat al het poeder is opgelost.

Steriliseren

Eenmaal opgelost, steriliseren in een autoclaaf bij 121 ° C gedurende 20 minuten.

Bloed aggregeert

Bij het verlaten van de autoclaaf laat men de kolf afkoelen tot de temperatuur tussen 40 en 50 ° C ligt; Het is een temperatuur die de menselijke huid ondersteunt en tegelijkertijd is de agar nog niet gestold.

Om dit te doen, wordt het flesje met de hand aangeraakt en als de warmte verdraagbaar is, is het de ideale temperatuur om de overeenkomstige hoeveelheid gedefibrineerd bloed toe te voegen (50 ml voor elke liter agar). Meng voorzichtig om te homogeniseren.

De doorgang van bloedaggregatie is cruciaal, want als het wordt gedaan wanneer het medium erg heet is, zullen de rode bloedcellen afbreken en zal het medium niet worden gebruikt om hemolyse waar te nemen.

Als het te koud wordt toegevoegd, zal het klonteren en zal het oppervlak van het medium niet glad zijn om goed te kunnen scoren.

Giet in petrischalen

Serveer in steriele petrischalen onmiddellijk na homogenisering van het bloed. In elke petrischaal wordt ongeveer 20 ml gegoten. Deze procedure wordt uitgevoerd in een afzuigkap met laminaire stroming of nabij de brander.

Bij het serveren van de bloedagar in de petrischalen mogen er geen luchtbellen op het oppervlak van de plaat achterblijven. Als dit gebeurt, gaat de vlam van de bunsenbrander snel over de plaat om ze te elimineren.

Men laat de platen stollen en wordt tot gebruik omgekeerd in een koelkast (2-8 ° C) bewaard. Voordat de bloedagarplaten worden gebruikt, moeten ze worden getemperd (op kamertemperatuur laten komen) om te kunnen worden gezaaid.

De voorbereide borden gaan ongeveer 1 week mee.

Referenties

1. Bayona M. Microbiologische omstandigheden voor de kweek van Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktische klinische microbiologie. Universiteit van Cadiz, 2e editie. UCA Publications Service.
3. "Bloedagar." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 10 december 2018, 14:55 UTC. 27 december 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Argentinië. Redactioneel Panamericana SA
5. CEDIVET Laboratorium Veterinair Diagnostisch Centrum. Guatemala. Beschikbaar op: trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5e ed.). Argentinië, Redactie Panamericana SA