- Basis
- Voorbereiding
- Zelfgemaakte bereiding van gal esculin agar
- Bereiding van galesculineagar uit een commercieel medium
- Toepassingen
- Gezaaid
- Interpretatie
- QA
- Beperkingen
- Referenties
De galesculineagar is een selectieve en differentiële mediumvaste kweek. Het wordt gebruikt als een diagnostische test om het vermogen van een bepaald micro-organisme te bepalen om te groeien in een medium dat gal bevat en ook om het glucoside-esculine af te breken tot esculetine en glucose.
Deze diagnostische test wordt gebruikt om soorten van het geslacht Streptococcus behorende tot groep D (galesculinepositief) te onderscheiden van andere groepen Streptococcus die negatief op deze test reageren.
Galesculine-agarplaat, gezaaid met een Enterococcus-stam (test positief). Bron: geen machineleesbare auteur opgegeven. Veronderstelde Philippinjl (op basis van auteursrechtclaims).
Opgemerkt moet worden dat sommige Streptococcus van de viridans-groep esculine kunnen hydrolyseren, maar niet kunnen groeien in aanwezigheid van gal in een concentratie van 40%, daarom is in dit medium de reactie voor deze groep negatief.
Anderzijds is het galesculinemedium ook bruikbaar voor de diagnose van Listeria monocytogenes of Aerococcus sp-soorten, aangezien deze micro-organismen galesculinepositief zijn.
Esculin Gal Agar is samengesteld uit pepton, vleesextract, ossengal, esculine, ijzercitraat, agar en gedestilleerd water. Sommige commerciële huizen bevatten natriumazide in de samenstelling van het medium.
Het medium kan in het laboratorium worden bereid als je alle verbindingen apart hebt, of het kan worden bereid uit het commerciële gedehydrateerde medium.
Basis
Het galesculinemedium bevat peptonen en vleesextract, beide verbindingen leveren de nodige voedingsstoffen voor de groei van micro-organismen.
Het bevat ook esculin; Deze verbinding is een glycoside gevormd door de vereniging van een eenvoudige monosaccharide (glucose) met een verbinding genaamd 6,7-dihydroxycoumarine of esculetine (aglucon), verbonden door een acetaal of glucosidische binding.
De test is gebaseerd op het aantonen of de bacterie in staat is esculine te hydrolyseren. Als dit gebeurt, wordt de esculine afgebroken tot esculetine en glucose. Esculetina reageert met het ijzer dat in het medium aanwezig is en vormt een donkerbruine, bijna zwarte verbinding.
Dit betekent dat het ijzercitraat als reactieontwikkelaar werkt. Deze eigenschap maakt Gal Esculin Agar een differentieel medium.
Gal van zijn kant is een remmer die de groei van sommige micro-organismen verhindert, daarom moet de bacterie, alvorens het esculine te splitsen, kunnen groeien in aanwezigheid van gal. Daarom wordt dit medium als selectief beschouwd.
De bacteriën die zich in deze omgeving kunnen ontwikkelen, zijn voornamelijk die welke in de darmomgeving leven.
In die zin voegen sommige commerciële bedrijven natriumazide toe aan het medium om de groei van enterische gramnegatieve bacillen verder te remmen, waardoor de selectiviteit van het medium voor de groei van Streptococcus toeneemt.
Ten slotte geeft de agar de vaste consistentie aan het medium en is water het oplosmiddel van de verbindingen.
Voorbereiding
Zelfgemaakte bereiding van gal esculin agar
Wegen:
5 g peptonen
3 g vleesextract
40 g rundergal
1 g esculin
0,5 g ijzercitraat
15 g agar
1000 ml gedestilleerd water
In het geval dat natriumazide wordt toegevoegd, wordt 0,25 g / liter afgewogen en aan het mengsel toegevoegd.
Los de componenten op in de liter gedestilleerd water, verwarm tot de verbindingen volledig zijn opgelost. Verdeel 5 ml in reageerbuisjes van 16 x 125 mm met schroefdop. Autoclaaf bij 121 ° C, 15 pond druk gedurende 15 minuten.
Haal uit de autoclaaf en kantel de buisjes op een drager, zodat de agar stolt in een brede fluitsnavel.
Bewaar in de koelkast tot gebruik. Voor het zaaien op kamertemperatuur brengen.
Galesculine-agarplaten kunnen ook worden bereid; in dit geval wordt het gehele mengsel in een kolf geautoclaveerd en vervolgens verdeeld in steriele petrischalen. Laat ze stollen en bewaar ze in de koelkast.
De pH van het medium moet 6,6 ± 0,2 zijn.
Bereiding van galesculineagar uit een commercieel medium
Weeg de hoeveelheid die is aangegeven op het inzetstuk. Dit kan per bedrijfspand verschillen. Ga vervolgens op dezelfde manier te werk als hierboven beschreven.
De pH van het medium moet 6,6 ± 0,2 zijn. De kleur van het gedehydrateerde medium is lichtbeige en het bereide medium is donker amber.
Commercieel galesculinemedium. Bron: foto gemaakt door de auteur MSc. Marielsa Gil.
Toepassingen
Het galesculinemedium wordt voornamelijk gebruikt om Groep D Streptococcus (galesculinepositief) te onderscheiden van de rest van de Streptococcusgroepen (galesculinegroep).
De combinatie van de hypersoute bouillon-groeitest met de gal-esculinetest kan een speciale groep van Groep D Streptococcus genaamd Enterococcus identificeren.
Deze speciale groep van Streptococcus behoort tot groep D van het bovengenoemde geslacht en ze zijn in staat esculine te hydrolyseren in aanwezigheid van gal, net als de rest van de leden van groep D, maar ze kunnen zich ook ontwikkelen in een gehypersout medium (BHI met chloride van 6,5% natrium), een eigenschap die het verschil maakt.
Daarom worden streptokokken die esculinegal hydrolyseren maar niet groeien in overgezouten bouillon, niet-enterokokken Groep D-streptokokken genoemd.
Gezaaid
Inoculeer het medium bij voorkeur uit een pure Todd-Hewitt 24-uurs bouillon.
Voeg 2 druppels toe aan het oppervlak van het medium met een pasteurpipet en verdeel in het medium met een platina lus.
Incubeer 48 uur bij 35 ° C, terwijl de incubatietijd wordt gehaald, kan worden gecontroleerd of er een positieve reactie is. Als de reactie aan het einde van de tijd negatief blijft, kan deze maximaal 72 uur worden geïncubeerd.
Interpretatie
Positieve reactie : verschijning van een donkerbruine, bijna zwarte kleur in de fluitsnavel (in het geval van de buistest) of zwart worden van de agar rond de kolonies (in het geval van de plaattest).
Negatieve reactie : geen zwart worden van het medium of zwart verschijnt in minder dan de helft van de buis na 72 uur incubatie. Aan de andere kant moet bacteriegroei in het medium zonder het verschijnen van de zwarte kleur als een negatieve test worden beschouwd.
QA
Om de kwaliteit van het medium te beoordelen, moet een Enterococcus faecalis ATCC 29212-stam beschikbaar zijn als positieve controle en een Streptocococus-stam die niet tot groep D behoort als een negatieve controle.
Beperkingen
-Media die geen natriumazide bevatten, laten de groei van enterische gramnegatieve bacillen toe. Sommigen van hen kunnen het midden zwart maken.
- Sommige commerciële huizen voegen een lage concentratie gal toe (10%) en om deze reden kunnen sommige streptokokken die niet tot groep D behoren zich in het medium ontwikkelen en esculine hydrolyseren, wat interpretatiefouten kan veroorzaken.
Referenties
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana SA Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana SA Argentina.
- Mac Faddin J. (2003). Biochemische tests voor de identificatie van bacteriën van klinisch belang. 3e ed. Redactioneel Panamericana. Buenos Aires. Argentinië.
- Lab Britannia. Esculinegal met azide-agar. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
- "Gal Esculin Agar." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 22 augustus 2017, 17:30 UTC. 22 april 2019, 17:35. nl.wikipedia.org.
- Laboratorios Bd. Gal Esculin Agar schuin. 2015 Beschikbaar op: bd.com
- Neogen Laboratories. Gal esculin agar. Beschikbaar op: foodsafety.neogen.com