NEUBAUER-KAMER: GESCHIEDENIS, KENMERKEN, GEBRUIK - BIOLOGIE - 2026

De Neubauer kamer , hematometer of hemocytometer, is een laboratoriuminstrument dat bestaat uit een speciale dikke glasplaat. Deze camera wordt gebruikt om bepaalde celtypen te tellen, zoals rode bloedcellen, witte bloedcellen en bloedplaatjes, maar kan ook worden gebruikt om sporen, sperma, parasieten enz. Te tellen.

Het vertoont enkele zeer eigenaardige kenmerken, aangezien het uit 3 zones bestaat, een centrale voor tellen en twee ondersteuningszones. Elke kamer heeft twee telzones of dradenkruizen, één bovenaan en één onderaan.

Neubauer kamer. Bron: SantiBadia. Bewerkte afbeelding.

Deze hebben meerdere onderverdelingen in een rastervorm. De telgebieden zijn de middelgrote vierkanten op de 4 hoeken van beide rasterplaten, plus het centrale vierkant.

De montage van de camera moet met de grootste zorg gebeuren, aangezien elk detail het celgetal beïnvloedt. Er kunnen veel fouten worden gemaakt, maar als ze zich voordoen, moet de camera worden gedemonteerd, schoongemaakt en weer in elkaar gezet. De belangrijkste fouten zijn onder meer:

De kamer overlopen of te weinig vullen, de kamer laten drogen, proberen overtollige vloeistof te verwijderen met gaas, de kamer kantelen bij het transporteren, een vuile of natte kamer vullen, de verdunning of het monster niet goed mengen, onder andere. Al deze fouten zullen resulteren in een onwerkelijke waarde.

Geschiedenis

De Neubauer-kamer is een precisie-instrument en het fabricageproces ondergaat een strikte kwaliteitscontrole. Het is gemaakt voor het nauwkeurig tellen van deeltjes of gevormde elementen per mm ³ , zoals cellen in verschillende vloeistoffen. De delicate afbeelding is uitgesneden met een diamantpotlood.

Neubauer kamerkenmerken

De hele kamer heeft de grootte van een normaal objectglaasje, zodat deze op het microscoopplatform kan worden geplaatst.

De kamer bestaat uit drie centrale rechthoekige oppervlakken (a, b, c). In zone “b” bevindt zich de R-zone of telzone, ook wel een reticulum genoemd. Een aan elke kant van de camera, gescheiden door zone "d".

Grafisch diagram van de Neubauerkamer. Bron: praktische gids voor hematologie. School of Bioanalysis van de Universiteit van Carabobo, Venezuela.

Elke rasterplaat is een gepolijst gebied waarin het telgebied is gegraveerd. Het bestaat uit een vierkant met een oppervlakte van 9 mm ² en is inwendig verdeeld in 9 vierkanten met een oppervlakte van elk 1 mm ² . De vier hoekvierkanten zijn verdeeld in 16 kleinere vierkanten (0,0625 mm ² in oppervlakte).

Deze rasters worden gevormd door een reeks millimeterlijnen die elkaar kruisen en vormen perfect getekende rasters die zijn afgebakend met de opgegeven metingen. Deze lijnen zijn gegraveerd met een diamanten punt.

Verbeterd Neubauer-reticulum. Bron: Praktische gids voor hematologie van de School of Bioanalysis van de Universiteit van Carabobo, Venezuela.

De vier zijden komen overeen met het telgebied. Aan deze zijden of hoeken worden de meeste cellen (rode bloedcellen en leukocyten) geteld, terwijl bloedplaatjes in het centrale gebied worden geteld.

De centrale zone heeft meer onderverdelingen, het bestaat uit een vierkant van 1 mm ² verdeeld in 25 vierkanten met elk een oppervlakte van 0,04 mm ² . Deze zijn op hun beurt onderverdeeld in 16 roosters met een oppervlakte van 0,0025 mm ² .

Beschrijving van het verbeterde Neubauer-reticulum. a) Vierkant van de hoeken, b) centraal vierkant, c) middenvierkant van het centrale vierkant. Bron: Praktische gids voor hematologie van de School of Bioanalysis van de Universiteit van Carabobo, Venezuela.

Zone "a" en "c" dienen als ondersteuning om een ​​speciaal afdekobject te plaatsen, een hematometrische objectglaasje of hematimeterafdekking genoemd.

De hoogte tussen de folie en het telvlak is 0,1 mm. Metingen van het oppervlak van de telboxen, evenals de hoogte van de kamer en de verdunning van het monster, zijn gegevens die nodig zijn om de uiteindelijke berekeningen te maken.

Toepassingen

Het wordt gebruikt voor het tellen van cellen. Het is vooral nuttig op het gebied van hematologie, omdat het de telling van de 3 bloedcelreeksen mogelijk maakt; dwz rode bloedcellen, witte bloedcellen en bloedplaatjes.

Het kan echter op andere gebieden worden gebruikt, bijvoorbeeld om sperma, sporen, bacteriën of andere belangrijke items te tellen, afhankelijk van het type monster.

Hoe te gebruiken?

Monstervoorbereiding

Om de celtelling uit te voeren, wordt over het algemeen uitgegaan van een eerdere verdunning. Voorbeeld: om witte bloedcellen te tellen, bereidt u een 1:20 verdunning voor met Turkse vloeistof. De verdunning wordt goed gemengd voordat de pipet wordt geladen en de Neubauer-kamer wordt gemonteerd.

Er zijn momenten dat een verdunning van 1:20 niet genoeg is om te tellen. Bijvoorbeeld bij patiënten die lijden aan bepaalde vormen van chronische leukemie. In deze gevallen moeten hogere verdunningen worden gemaakt, zoals 1: 100.

Als, aan de andere kant, de telling erg laag is, zoals bij ernstige leukopenie, kunnen kleinere verdunningen worden gemaakt om het monster te concentreren. Voorbeeld: u kunt een verdunning van 1:10 maken.

De aangebrachte wijzigingen hebben invloed op de berekeningen.

Neubauer kamerbevestiging

De Neubauer-kamer wordt samengesteld door het hematometrische objectglaasje in het centrale gebied te plaatsen. Beiden moeten heel schoon en droog zijn. Om de lamel te plaatsen, wordt deze bij de randen vastgehouden en voorzichtig op de camera laten vallen.

Dit wordt gevuld door de punt van een automatische Thoma-pipet of -pipet in een hoek van 35 ° op de rand van de laadzone te plaatsen. De vloeistof wordt vlot afgevoerd en de laadruimte wordt gevuld door capillaire werking. Dit gebeurt van beide kanten om de twee dradenkruizen te laden.

De dradenkruizen mogen niet overbelast worden en mogen ook niet vloeibaar worden gemaakt. De belasting moet exact zijn. Het is belangrijk dat de vulling homogeen gebeurt, dat wil zeggen dat er geen luchtbellen mogen zijn.

Zodra de kamer is gemonteerd, laat deze 2 minuten rusten, zodat de cellen naar de bodem neerslaan en hun visualisatie en telling gemakkelijker wordt.

Na de rusttijd wordt het ter observatie op de tafel van de lichtmicroscoop gemonteerd. Het wordt eerst gefocust met een 10X objectief en indien nodig gaat het naar 40X.

Om de visualisatie ervan te verbeteren, wordt de doorgang van licht van de microscoop verminderd. Om dit te doen, wordt de condensor neergelaten en wordt het diafragma enigszins gesloten.

Tellen

Voor het tellen van witte bloedcellen of leukocyten moet het volledige oppervlak van de vier middenhoekvierkanten en het centrale vierkant van elk reticulum worden geteld.

Het tellen begint in het vierkant in de linkerbovenhoek. Je begint vanaf het eerste vierkant van de eerste rij, dat wil zeggen van links naar rechts totdat je het andere uiteinde bereikt.

Daar ga je naar beneden en kijk je van rechts naar links terug tot je het andere uiteinde bereikt, enzovoort, de cellen binnen elk raster worden op een zigzag-manier geteld. De 16 roosters van elk mediaan vierkant worden geteld.

Om te voorkomen dat een cel twee keer wordt geteld, zijn er regels voor de cellen die zich op de grenslijnen van elk raster bevinden. Cellen op de linker- en bovenste regel worden geteld en cellen op de rechter- en onderste regel worden genegeerd.

Er moet een handmatige celteller beschikbaar zijn zodat de operator zo vaak op de apparaattoets drukt als er cellen worden waargenomen. Met behulp van de teller kan de operator tellen zonder op te kijken vanuit het microscopisch veld. Aan het einde van de telling ziet u het totale aantal getelde cellen.

Berekeningen

Voor de berekeningen kunt u op verschillende manieren te werk gaan. Een enkele rasterplaat kan worden geteld of beide kunnen worden geteld en beide worden gemiddeld. In deze twee situaties moeten de getelde cellen worden vermenigvuldigd met een factor, die in dit geval 40 zou zijn. En zo wordt de totale telling per mm ^{3 verkregen} .

Maar als de twee roosters worden geteld en het gemiddelde niet wordt genomen, moet het met een andere factor worden vermenigvuldigd, in dit geval met 20.

-Multiplicatiefactor

Hier is hoe de vermenigvuldigingsfactor wordt berekend.

Bij de berekeningen wordt rekening gehouden met verschillende gegevens, waaronder de verdunningstiter, de hoogte van de kamer en het getelde oppervlak.

Verdunning

De standaard gebruikte verdunning is 1:20 voor het aantal leukocyten.

Kamer hoogte

De hoogte tussen de kamer en de bloedcelplaat is 0,1 mm.

Geteld gebied

Indien 5 vierkanten van 1 mm ² gebied geteld , betekent dit dat de totale telling gebied 5mm ² . Deze gegevens moeten worden vermenigvuldigd met de hoogte van de kamer om het totale getelde volume te verkrijgen. Dat wil zeggen 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³ .

Formules en berekeningen

Met de gegevens die we hebben wordt gezegd:

Als in 0,5 mm ^{3 -} er wordt --- aantal cellen geteld

In 1 mm ³ --- zal er - X aantal cellen zijn

X aantal cellen = (aantal cellen geteld x 1) / 0,5 mm ³

Maar ook met verdunning moet rekening worden gehouden. Daarom is de formule als volgt:

(aantal getelde cellen x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Tenslotte, om samen te vatten, kan het aantal getelde cellen worden vermenigvuldigd met 40. Aldus wordt de waarde van leukocyten per mm ^{3 verkregen} .

Als de twee dradenkruizen worden geteld, worden de gegevens voor het getelde gebied gewijzigd, wat in dit geval 10 vierkanten zou zijn, dat wil zeggen 10 mm ² . En een totaal geteld volume van 1 mm3. De formule zou zijn:

(aantal cellen geteld x 1) x 20/1 mm ³

Daarom zou in dit geval de vermenigvuldigingsfactor 20 zijn.

Fouten

-Als bij het laden van de camera deze met vloeistof wordt overschreden of overschreden, zal de hoogte van de camera variëren. Dit resulteert erin dat de telling hoger is dan het echte werk. Als je het teveel probeert te verwijderen met gaas of katoen, is dit een grote vergissing. Deze actie zorgt ervoor dat de cellen zich concentreren, waardoor het aantal toeneemt.

-Als het slecht is geladen, zal de telling lager zijn dan de echte.

-Als de camera is gemonteerd en mag drogen, is het niet meer mogelijk om te tellen omdat dit verkeerde resultaten geeft.

-Als de verdunning van het monster niet goed wordt gemengd voordat de kamer wordt gevuld, bestaat de kans op een fout in de aflezing, omdat de cellen niet homogeen worden verdeeld. Daarom zal er een lagere of hogere celconcentratie zijn, afhankelijk van of het monster respectievelijk van het oppervlak van de vloeistof of van de onderkant van de buis wordt genomen.

-De aanwezigheid van bellen vermindert de hoeveelheid vloeistof die het reticulum moet binnendringen, waardoor de juiste visualisatie en distributie van de cellen wordt verstoord. Dit alles heeft een aanzienlijke invloed op de resultaten.

-Tijdens het tellen, kijk niet omhoog van de microscoop totdat elk groot vierkant is voltooid om te voorkomen dat u verdwaalt.

-Een reden voor een fout is het kantelen van de camera na montage. Om deze reden moet de tafel van de microscoop voorzichtig worden opgetild.

Aanbeveling

Als u om welke reden dan ook een afwijking in het vullen van de kamer ontdekt, is het raadzaam dat preparaat te demonteren, de kamer te reinigen en helemaal opnieuw in elkaar te zetten.

Wees extra voorzichtig bij het schoonmaken van de camera om krassen op het dradenkruis te voorkomen. Houd er echter rekening mee dat het hematometrische objectglaasje kwetsbaar en kwetsbaar is. Onjuiste behandeling kan het breken.

Zorg ervoor dat de cellen goed verdeeld zijn voordat u begint met tellen. Een ongelijke verdeling van cellen ontstaat door een slechte menging of verdunning van monsters. Als dit gebeurt, moet de montage worden herhaald.

Een manier om te weten of de cellen goed verdeeld zijn, is door de telling van elk groot vierkant te vergelijken. Het aantal cellen dat voor elk vierkant wordt geteld, mag niet overdreven verschillen van de ene naar de andere.

-Als het aantal witte bloedcellen hoger is dan 50.000 mm ^3, is het raadzaam de telling te herhalen en een grotere verdunning te maken.

-Als u de verdunning wijzigt, moet u de vermenigvuldigingsfactor opnieuw berekenen, aangezien dit de formule beïnvloedt.

Referenties

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A.Vergelijking van de spermaconcentratie met behulp van de kamer van Makler en de kamer van Neubauer. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Verkrijgbaar in: scielo.
2. Neubauer kamer. (2018, 27 maart). Wikipedia, de gratis encyclopedie. Consultatiedatum: 04:10, 23 juni 2019 op es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Toepassing van een alternatieve telmethode in de Neubauerkamer om de concentratie Trichomonas vaginalis te bepalen. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Beschikbaar op: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Analyse van het spermogram. Rev. Venez. Endocrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Verkrijgbaar in: ve.scielo
5. Praktische gids hematologie van de School of Bioanalysis van de Universiteit van Carabobo. Venezuela.1998